Dna fingerprinting
Páginas: 5 (1179 palabras)
Publicado: 13 de junio de 2011
Introducción
Dentro de las técnicas de biología molecular se dispone del análisis de fragmentos de longitud polimórfica (RFLPs), que sirven para conocer la variación en la longitud de un fragmento particular de DNA, entre individuos diferentes, después de que el DNA ha sido cortado con enzimas de restricción(1).
La técnica de la huella digital del DNA (DNA fingerprinting) en términosgenerales permite detectar las diferencias en el DNA en diferentes personas. Los métodos para utilizar esta técnica se basan en el análisis de fragmentos dados por el corte de ciertas regiones variables con enzimas de restricción.(2) Esta técnica se fundamenta en la longitud de los fragmentos que difieren principalmente porque tenemos cantidades diferentes de DNA “no funcional”, es decir, segmentos deDNA que no codifican para proteínas. Estas secuencias de bases tienden a ser repetidas. El número de veces que cada secuencia se repite varia de persona a persona, por lo tanto, existen fragmentos de DNA con longitudes diferentes. (1)
Las enzimas de restricción son endonucleasas de reconocimiento de secuencias específicas dentro del DNA. Estas catalizan la ruptura del enlace fosfodiester entredos nucleótidos dentro de esa secuencia conocida como RE palindromica (en dirección 5’a 3’ en cada cadena, la secuencia es la misma). Una vez cortado el DNA, los pedazos son separados por tamaño en una gelatina de agarosa por el método conocido como electroforesis.(2)
Figura 1: Electroforesis en gel de agarosa
Para llevar a cabo dicho análisis se obtiene DNA de cualquier material humano:células de mucosas, fragmentos de tejidos, fluidos corporales (sangre y semen), folículos del pelo, muestras de tejido seco ancestral o momificado, colillas de cigarro.(2)
En el presente práctico se simulara una prueba de DNA forense.
Objetivos
- Conocer los fundamentos teóricos de la técnica de DNA fingerprint.
- Realizar un análisis de DNA fingerprinting (RFLP).
- Estudiar lastécnicas de enzimas de restricción y la técnica de electroforesis de DNA.
- Visualizar y validar los resultados de una evidencia de DNA.
Materiales y Métodos
Materiales (3)
* 5 microtubos con 10µl de DNA de los sospechosos.
* 1 microtubo con 10µl de DNA de la escena del crimen.
* 1 microtubo con mezcla de enzimas (ENZ)
* 1 microtubo con tampón de carga (LD)
*Micropipeta
* Puntas para micropipeta
* Baño termorregulador
* Hielo
* Centrifuga
* Transiluminador UV
* Gel de agarosa
* Instrumento para Electroforesis
Métodos (3)
* Se marcaron los microtubos de colores desde S1 a S5, además otro microtubo como EC (DNA de la Escena del crimen).
* Transferimos 10µl de DNA de los sospechosos a cada microtubocorrespondiente, luego 10 µl de la mezcla de enzimas de restricción.
* Los microtubos fueron llevados a centrifugación por 15 segundos.
* Se dejó incubar los microtubos en un baño termorregulador a 37 °C por 30 minutos, pasado este tiempo se retiraron del baño termorregulador y se dejaron en hielo, para detener la reacción.
* Luego se agregaron 5µl de tampón de carga (LD).
*Finalmente se cargaron las muestras en orden de: marcador molecular, EC,S1 – S5 , en Gel de agarosa previamente preparado por el profesor y se realizó la técnica de electroforesis en gel de agarosa.
* Al terminar la electroforesis se llevó a transluminador UV y observamos los resultados.
Resultados.
A continuación se presenta el patrón de restricción obtenido para la escena del crimenanalizada en el práctico:
Cuadro I: Patrón de restricción obtenido
M EC 1 2 3 4 5
Tabla 1: Contenido de cada celda en electroforesis
Columna de Migración | Origen de muestra. |
M | Marcador del peso Molecular |
EC | Escena del Crimen |
1 | Sospechoso 1 |
2 | Sospechoso 2 |
3 | Sospechoso 3 |
4 | Sospechoso...
Dentro de las técnicas de biología molecular se dispone del análisis de fragmentos de longitud polimórfica (RFLPs), que sirven para conocer la variación en la longitud de un fragmento particular de DNA, entre individuos diferentes, después de que el DNA ha sido cortado con enzimas de restricción(1).
La técnica de la huella digital del DNA (DNA fingerprinting) en términosgenerales permite detectar las diferencias en el DNA en diferentes personas. Los métodos para utilizar esta técnica se basan en el análisis de fragmentos dados por el corte de ciertas regiones variables con enzimas de restricción.(2) Esta técnica se fundamenta en la longitud de los fragmentos que difieren principalmente porque tenemos cantidades diferentes de DNA “no funcional”, es decir, segmentos deDNA que no codifican para proteínas. Estas secuencias de bases tienden a ser repetidas. El número de veces que cada secuencia se repite varia de persona a persona, por lo tanto, existen fragmentos de DNA con longitudes diferentes. (1)
Las enzimas de restricción son endonucleasas de reconocimiento de secuencias específicas dentro del DNA. Estas catalizan la ruptura del enlace fosfodiester entredos nucleótidos dentro de esa secuencia conocida como RE palindromica (en dirección 5’a 3’ en cada cadena, la secuencia es la misma). Una vez cortado el DNA, los pedazos son separados por tamaño en una gelatina de agarosa por el método conocido como electroforesis.(2)
Figura 1: Electroforesis en gel de agarosa
Para llevar a cabo dicho análisis se obtiene DNA de cualquier material humano:células de mucosas, fragmentos de tejidos, fluidos corporales (sangre y semen), folículos del pelo, muestras de tejido seco ancestral o momificado, colillas de cigarro.(2)
En el presente práctico se simulara una prueba de DNA forense.
Objetivos
- Conocer los fundamentos teóricos de la técnica de DNA fingerprint.
- Realizar un análisis de DNA fingerprinting (RFLP).
- Estudiar lastécnicas de enzimas de restricción y la técnica de electroforesis de DNA.
- Visualizar y validar los resultados de una evidencia de DNA.
Materiales y Métodos
Materiales (3)
* 5 microtubos con 10µl de DNA de los sospechosos.
* 1 microtubo con 10µl de DNA de la escena del crimen.
* 1 microtubo con mezcla de enzimas (ENZ)
* 1 microtubo con tampón de carga (LD)
*Micropipeta
* Puntas para micropipeta
* Baño termorregulador
* Hielo
* Centrifuga
* Transiluminador UV
* Gel de agarosa
* Instrumento para Electroforesis
Métodos (3)
* Se marcaron los microtubos de colores desde S1 a S5, además otro microtubo como EC (DNA de la Escena del crimen).
* Transferimos 10µl de DNA de los sospechosos a cada microtubocorrespondiente, luego 10 µl de la mezcla de enzimas de restricción.
* Los microtubos fueron llevados a centrifugación por 15 segundos.
* Se dejó incubar los microtubos en un baño termorregulador a 37 °C por 30 minutos, pasado este tiempo se retiraron del baño termorregulador y se dejaron en hielo, para detener la reacción.
* Luego se agregaron 5µl de tampón de carga (LD).
*Finalmente se cargaron las muestras en orden de: marcador molecular, EC,S1 – S5 , en Gel de agarosa previamente preparado por el profesor y se realizó la técnica de electroforesis en gel de agarosa.
* Al terminar la electroforesis se llevó a transluminador UV y observamos los resultados.
Resultados.
A continuación se presenta el patrón de restricción obtenido para la escena del crimenanalizada en el práctico:
Cuadro I: Patrón de restricción obtenido
M EC 1 2 3 4 5
Tabla 1: Contenido de cada celda en electroforesis
Columna de Migración | Origen de muestra. |
M | Marcador del peso Molecular |
EC | Escena del Crimen |
1 | Sospechoso 1 |
2 | Sospechoso 2 |
3 | Sospechoso 3 |
4 | Sospechoso...
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