Dna recombinante

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  • Publicado : 24 de mayo de 2011
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El DNA recombinante se construye mediante la incorporación de un fragmento de DNA foráneo en una molécula pequeña capaz de replicarse (por ejemplo, un plásmido bacteriano) yde amplificar el fragmento incorporado en ella, dando lugar a un clon molecular del DNA insertado.
Las enzimas de restricción cortan el DNA en sitios diana específicos; trasel corte, se generan fragmentos concretos con extremos cohesivos apropiados para su inserción en un vector que haya sido cortado con la misma enzima.
Una colección de clonesde DNA que sea representativa de todo el genoma de un organismo se denomina genoteca genómica.
Se pueden detectar clones individuales de una genoteca utilizando sondas quereconozcan específicamente un DNA o su producto proteico, o mediante transformación de un mutante nulo.
Es posible separar los diferentes fragmentos producidos tras digestióncon una enzima de restricción porque migran en función de su tamaño cuando se someten a electroforesis en gel.
Una vez que las moléculas de DNA digerido con enzimas derestricción o las moléculas de RNA se han separado por electroforesis en gel, se pueden detectar moléculas específicas mediante la utilización de sondas.
Los sitios diana para lasenzimas de restricción pueden situarse en un mapa y constituyen marcadores que son muy útiles para la manipulación del DNA.
Un gen puede aislarse mediante el análisissecuencial de clones contiguos parcialmente solapados, partiendo de un marcador ligado.
Tras la clonación de un gen, puede determinarse su secuencia nucleotídica, y esta secuenciapuede utilizarse para estudiar su función y su evolución.
Una secuencia concreta puede amplificarse utilizando un par de cebadores que delimiten la secuencia de interés.
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