Tecnologia del dna recombinante

CATEDRA DE BIOQUIMICA FACULTAD DE MEDICINA UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE

TECNOLOGIA DEL DNA RECOMBINANTE
AÑO 2007
Autores Dr. Gustavo Agolti. Profesor Adjunto por

Concurso. Cátedra de Bioquímica. Facultad de Medicina. UNNE Dr. Alexis Codutti. Jefe de Trabajos Prácticos Adscripto .Cátedra de Bioquímica. Facultad de Medicina. UNNE Sr. Carlos Alexis Vera. Ayudante alumno por concurso.Cátedra de Bioquímica. Facultad de Medicina. UNNE. Srta. Rocío M. Campos Collado. Ayudante Alumno por concurso .Cátedra de Bioquímica. Facultad de Medicina. UNNE. Dra. Nora C. Brandan. Jefa de Cátedra por concurso. Cátedra de Bioquímica. Facultad de Medicina. UNNE

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INDICE

Bibliografía: ------------------------------------------------------------------- 33 CONSTRUCCIÓN Y CLONACIÓN DEMOLÉCULAS DE DNA RECOMBINANTE ----------------------------------------------------------4 GLOSARIO: ------------------------------------------------------------------ 30 INTRODUCCION: ------------------------------------------------------------2 ORGANISMOS GENÉTICAMENTE MODIFICADOS ------------- 29 OTRAS TECNICAS IMPORTANTES DE RECOMBINACION DEL DNA.------------------------------------------------------------------------- 18 OTRAS TECNICAS RELEVANTES DE LA BIOLOGIA

MOLECULAR ------------------------------------------------------------- 27 REVISIÓN DE LA ESTRUCTURA ADN / GEN: -----------------------3 SCREENING Y EXPRESION DE DNA EXTRAÑO EN CLONES BACTERIANOS: ---------------------------------------------------------- 12

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TECNOLOGIA DEL DNA RECOMBINANTE

1.INTRODUCCION:

Lahabilidad para detectar y aislar genes normales y mutados, su secuencia y la expresión de sus productos proteicos ha tenido un importante impacto en la biología y la medicina. La tecnología del DNA recombinante ha hecho posible investigar más a fondo la estructura y función de los genes, especialmente de los genes eucarióticos que eran inaccesibles por otros métodos. Estas investigaciones generan nuevosinterrogantes e inquietudes, muchos de los cuales tienen profundas implicancias éticas. La Tecnología del DNA recombinante se originó en los comienzos de 1970 con el descubrimiento de las endonucleasas de restricción, enzimas capaces de realizar el clivaje específico del DNA en fragmentos determinados.

2.REVISIÓN DE LA ESTRUCTURA ADN / GEN: El ácido desoxirribonucleico (DNA) está formado por doscadenas polinucleótidicas antiparalelas (5' fosfato ÿÿ> 3' hidroxilo, 3' hidroxilo ÿÿ> 5' fosfato) unidas por puentes de hidrógeno entre los pares de bases (pb) complementarias dAMP - dTMP y dCMP - dGMP. Los genes son hileras lineales de pares de bases de DNA y son usualmente

transcriptos en moléculas de ácido ribonucleico (RNA) de cadena única. El cromosoma es una hilera lineal (circular enbacteria) de genes y el genoma es el complemento haploide de DNA en la célula.

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Una célula bacteriana (por ejemplo Escherichia coli) contiene un cromosoma (haploide) con 3 x 106 pb y cerca de 2.000 genes. Una célula humana contiene 46 cromosomas (diploide, 23 pares haploides) con cerca de 3 x 109 pb (tamaño del genoma haploide) y cerca de 50.000 genes. Debido al azar estadístico en lasecuencia de DNA, cada 4 4 (256) pb o 46 (4096) pb se incluirán en el promedio, por ejemplo, las secuencias únicas que se encuentran a continuación (o alguna otra secuencia de 4 o 6 pb).

GATC

GAATTC

O

CTAG

CTTAAG

Por convención, la cadena superior en una secuencia de DNA de doble cadena se lee 5' fosfato a 3' hidroxilo y la cadena inferior se lee 3' hidroxilo a 5' fosfato. Las dossecuencias de doble cadena ilustradas se denominan Palíndromes ya que se leen exactamente igual en ambas cadenas en la dirección 5' a 3'.

Figura 1: Secuencia de doble cadena denominada “Palíndrome”.

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3.CONSTRUCCIÓN Y CLONACIÓN DE MOLÉCULAS DE DNA RECOMBINANTE:

3.1. ENZIMAS DE RESTRICCIÓN:

Las enzimas de restricción son endonucleasas que clivan (hidrolizan) en una forma específica...