Efecto De La Influencia Combinada De Colorantes Intercaladores - Sensibilizadores E Irradiación De Láseres Ultravioleta En El Adn Del Maíz

(NORMALIZADO)
EFECTO DE LA INFLUENCIA COMBINADA DE COLORANTES INTERCALADORES - SENSIBILIZADORES E IRRADIACIÓN DE LÁSERES ULTRAVIOLETA EN EL ADN DEL MAÍZ


Jorge Acurio Saavedra
Alfonso Aréstegui Pezúa
Elena E. Madera Tupayachi
Julia G. Muñiz Durán
Elena E. Acurio S.
INTRODUCCIÓN


Los láseres son denominados nuevas fuentes de radiación óptica, con una pequeñadivergencia angular, alto grado de coherencia y monocromatismo. Los diferentes tipos de láseres creados en la actualidad, trabajan en regímenes continuos de impulso, suministran la generación de radiación en diferentes longitudes de onda en los diapasones espectrales (bandas) ultravioleta, visible e infrarrojos. En los últimos años, el desarrollo de la técnica de láseres despertó el interés para lainteracción de radiaciones coherentes y monocromáticas con sistemas biológicos (Neidle, et al. 1984).

Se conocen diferentes aspectos sobre la acción biológica de la radiación con láseres; sin embargo, en dichos trabajos la atención prestada a los mecanismos de acción por la radiación láser (RL) hacia objetos biológicos es insuficiente. En este sentido, el objetivo del estudio fue interpretarbrevemente los antecedentes que se tenían por bibliografía sobre la acción biológica de las radiaciones láser y poner en evidencia la probabilidad de formación de rupturas mono y bihebradas en el ADN del maíz, que pueden ser la causa de la acción mutagénica por la RL y colorantes intercaladores-sensibilizadores en plantas, mediante aislamiento y purificación del ADN, irradiación con láser,espectrofotometría de luz UV y visible y electroforesis en gel.

Se obtuvieron coleoptilos de maíz entre 3 y 4 cm de longitud y a partir de éstos se extrajeron y purificaron volúmenes de ADN correspondientes a 1,5 gr del material; posteriormente, se sometieron a RL las diferentes variantes en complejos ADN-colorante intercalante (8-Methoxypsoralen u 8-MOP, Acridone y 6-Mercapthopurina ó 6-MP) y losrespectivos casos control. Luego de los datos obtenidos mediante pruebas de espectrofotometría y electroforesis, se demostró que la variante en complejo ADN-6MP, no siendo un buen intercalador, alcanza un máximo efecto en la formación de rupturas mono y bihebradas frente a los complejos ADN-8MOP y ADN-Acridone en las mismas condiciones y concentraciones.
OBJETIVOS:

• Inducir la formación derupturas mono y bihebradas en el ADN del maíz, por acción combinada de colorantes intercaladores - sensibilizadores e irradiación de láseres ultravioleta.


• Poner en evidencia la probabilidad de formación de rupturas mono y bihebradas en el ADN del coleoptilo del maíz, por efecto de la acción combinada de colorantes intercaladores - sensibilizadores e irradiación de láseres ultravioletaque pueden ser la causa de la acción mutagénica en plantas.


HIPÓTESIS


La interacción de la RL con colorantes intercaladores-sensibilizadores presentan un impacto mutagénico en los sistemas biológicos, los cuales pueden ser evaluados por técnicas que permitan observar rupturas mono y bihebradas en el ADN.


METODOLOGÍA


1. El aislamiento del ADN se realizó mediante elmini-método descrito por Lyhtenshtain y Draner, 1988.


2. La radiación se efectuó con ayuda del láser LGI-21.


Dosis de radiación 3,6.10-3 J.
Intensidad-densidad de radiación 1,9.108 Wt/m.seg
Frecuencia 100 Hz.
Potencia del impulso 2,2 Wt.
Tiempo del impulso 9.10-9 seg.
Tiempo de radiación 30 min.


3. La preparación de los geles de agarosa y la corridaelectroforética en condiciones nativas y denaturantes se realizó por protocolos universalmente admitidos (Maniatis et al, 1982).


4. La tinción del ADN en geles de agarosa, se realizó con el colorante fluorescente bromuro de etidio.


5. El fotografiado se efectuó en luz ultravioleta de paso (trans linker) y reflejado (cross linker). La película Polaroid TG PE57 ó 667 (3000 unid eg ASA)...