El Viangre

TECNICAS DE CONSERVACION
Tradicionalmente el mantenimiento de las levaduras no se ha considerado problemático pues se pueden efectuar subcultivos tras un largo periodo sin cultivo. Sin embargo, las células sobrevivientes son poco numerosas y pueden no ser representativas del cultivo inicial. En efecto, en comparación con otras bacterias están más predispuestas a sufrir daños durante elmantenimiento. En efecto, no producen esporas resistentes como los mohos o algunas bacterias, y su tamaño relativamente importante las vuelve frágiles a los tratamientos de crioconservacion como consecuencia de la formación de cristales de hielo en el interior de las células.
Principales técnicas de conservación
* El subcultivo
* La desecación
* La liofilización
* La congelación

ELSUBCULTIVO.
Se trata de transferir regularmente las células a un medio de cultivo recién preparado. Los medios Yeast Morphology o Yeast Base más glucosa son adecuados para la mayoría de las cepas. Los medios líquidos son preferibles a los sólidos que pueden provocar la formación de ascosporas, lo que no es deseable para la estabilidad de las cepas. Tras la transferencia al medio recién preparado lostubos se incuban a temperatura óptima de crecimiento hasta alcanzar la fase estacionaria, generalmente durante 72 horas, a veces más en las cepas de crecimiento lenta; las cepas se colocan a continuación a una temperatura comprendida entre 1 y 4 °C y pueden permanecer así hasta 6 meses.
LA DESECACION.
La desecación se lleva acabo con ayuda de silica gel.
La técnica directa consiste el colocaralgunas gotas de una suspensión concentrada de células, recogidas en fase estacionaria, en leche estéril en un pequeño tubo que contenga silica gel (alrededor de un 1cm de altura) previamente autoclavado. Los geles se conservan a temperatura ambiente durante dos semanas y después se transfieren a 4°C.
Las células se ponen de nuevo en cultivo mezclando u poco de gel con un medio de cultivo. Lasupervivencia de las células es variable según las cepas. Se ha demostrado que alrededor del 50% de las células son revivificables tras dos años en silica gel, y la estabilidad de los caracteres es muy variable según las cepas. Esta técnica no es aplicable a todas las cepas y es necesario comprobar la estabilidad de una cepa frente a la desecación antes de escoger este modo de conservación.LIOFILIZACION.
Un gran número de parámetros van a tener influencia sobre la supervivencia de las células tras la liofilización
* La edad del inocuo es un factor importante, se ha desarrollado, en todas las especies, que células tomadas en fase estacionara sobreviven mejor que células más jóvenes.
* En medio de cultivo utilizado para el crecimiento: generalmente un medio pobre permite mejorsupervivencia que un medio rico.
* La oxigenación del medio tiene influencia, aunque variable según las cepas.
* En medio de suspensión puede aportar una protección a las células: se pueden utilizar varias sustancias: glucosa- suero, inositol – suero.
* El tiempo de deshidratación y el nivel de deshidratación: se admite generalmente que un 1% de humedad residual es deseable, pero existenpocos datos sobre la supervivencia a otros niveles de humedad.
* El medio de rehidratación: un medio más diluido parece más favorable para la revivificación de las células.
Es así pues es necesario probar estos diferentes parámetros con el fin de adoptar del medio aun cepa.
LA CONGELACION:
Las condiciones sobre la edad de las células y el cultivo con vistas a una supervivencia máxima con lasmismas que en la liofilización.
La velocidad de congelación es el factor más importante: una velocidad de 10°C por minuto permite mejor la supervivencia. Una congelación de dos etapas da igualmente resultados: una etapa a -30°c durante dos horas antes de una conservación a -70°C o .196°C.
La supervivencia tras la congelación en muy superior a la obtenida tras la liofilización, por medio del...