Electroforesis En Geles

16. Electroforesis desnaturalizante en geles de poliacrilamida. Análisis de proteínas de hojas de Arabidopsis thaliana
Ana María Maldonado Alconada, Jesús V. Jorrín Novo
Departamento de Bioquímicay Biología Molecular, Campus Universitario de Rabanales, Edificio Severo Ochoa, 14071-Córdoba

RESUMEN

La electroforesis en geles de poliacrilamida es uno de los métodos más utilizados para lapurificación, análisis y caracterización de proteínas. La técnica permite separar moléculas cargadas y explota diferencias en movilidad cuando se les somete a la acción de un campo eléctrico. Laelectroforesis se lleva a cabo sobre un soporte inerte, generalmente sobre geles de poliacrilamida (PAGE). En la electroforesis desnaturalizante (SDS-PAGE), como su propio nombre indica, se utilizan agentesdesnaturalizantes de proteínas, como pueden ser: detergentes (p.e. SDS), caótropos (p.e. urea) y agentes reductores (2- mercaptoetanol, DTT). Para la visualización de las proteínas se utilizandiferentes métodos de tinción, siendo el más habitual el azul de coomassie. En la SDS-PAGE, la separación es función del tamaño (masa molecular), lo que permite determinar el peso molecular de las proteínas.Para ello se compara la movilidad electroforética (Rf) de la proteína de peso molecular desconocido con el de proteínas de referencia de peso molecular conocido. En esta práctica, en la que sepretende que el alumno comprenda el fundamento teórico de esta técnica y sus aplicaciones, se llevará a cabo la separación de proteínas de hojas de A. thaliana mediante SDS-PAGE. Palabras clave:Desnaturalizante, electroforesis, proteínas, rubisco. Abreviaturas empleadas: APS: persulfato amónico; DTT: ditiotetriol; PAGE: electroforesis en geles de poliacrilamida; SDS-PAGE: electroforesisdesnaturalizante en gel de poliacrilamida; SDS: dodecil sulfato sódico; TEMED: N,N,N´,N´-tetrametilentilendiamina. 1. INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS 1.1. Separación electroforética de proteínas. La separación y...