ELECTROFORESIS EN GELES DE POLIACRILAMIDA

ELECTROFORESIS EN GELES DE POLIACRILAMIDA

SDS-PAGE

Presencia de Sodio Dodecil Sulfato bajo condiciones reductoras (SDSPAGE)
Método rápido, reproducible y de bajo costo
Utilizado paracuantificar, comparar y caracterizar proteínas
Técnica analítica semipreparativa : se separan biomoléculas según su tamaño
molecular bajo la acción de un campo eléctrico. (Laemmli 1.970).
Permite separarproteínas haciéndolas pasar por un gel o resina: bisAcrilamida, la
cual es un agente entrecruzador que genera un polímero sobre el cual se adherirán
las proteínas.
La separación electroforética serealiza en condiciones desnaturalizantes, al añadir
compuestos que alteren las condiciones nativas de las proteínas y que se agrupan
en una solución denominada: tampón de carga.

GEL DEPOLIACRILAMIDA (PAGE)
Soporte: Gel de Poliacrilamida
* Polimerización de dos componentes: Acrilamida + Bisacrilamida
* Variación de la concentración

variación del tamaño de poro

[poliacrilamida]Electroforesis vertical

1. Preparación del gel
2. Montaje de la cubeta
3. Aplicación de la muestra
4. Electroforesis
5. Detección por tinción:
Azul de Coomassie
Sales de plata

tamaño poroCondiciones de la PAGE:
* No desnaturalizantes: separamos por CARGA y TAMAÑO
* Desnaturalizantes: separamos sólo por TAMAÑO

PAGE
SDS-PAGE

Agentes desnaturalizantes: SDS (dodecilsulfatosódico), urea,
reductores: DTT, β-mercaptoetanol
• SDS: detergente aniónico (-), dota a todas las proteínas de carga (-)
todas migrarán hacia el ánodo (+), separándose sólo por tamaño
50 kDa

S-S

S-SS-S
S-S

+ SDS

S-S
S-S

- - - -- --- --- - - -- - S-S - S-S - - - - - - S-S -

+ SDS
+ DTT

- --- - - - - - - - - -- -

25 kDa

44 kDa

Tampón de carga contiene:Mercaptoetanol, un agente reductor, que
se encarga de eliminar los puentes
disulfuro que se forman en la estructura
terciaria de las proteinas entre los restos
Cisteína
El SDS (lauril sulfato) es el...