Elisa

BENEMERITA UNIVESIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
LIC. QUIMICOFARMACOBIOLOGO
LAB. DE PARASITOLOGIA I
CATEDRATICO:
Q. F. B. HUGO FLORES ALAVAR
PRUEBA DE ELISA
ALUMNA:ALBA MARIANA GONZÁLEZ PÉREZ
SECCIÓN:
MIERCOLES 12 – 2 PM
OTOÑO 2010
ELISA
"Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay" Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas
Se basa en la detección de un antígenoinmovilizado sobre una fase sólida mediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una reacción cuyo producto, puede ser medido espectrofotométricamente.
Dispositivos empleados en ELISALos lectores ELISA son espectrofotómetros capaces de realizar lecturas seriadas, disponen de sistemas de filtros que sólo permiten la lectura de una o pocas longitudes de onda. Son la que secorresponden con las necesarias para determinar la densidad óptica de los cromógenos más comúnmente utilizados.
Fases de un ensayo ELISA
* Conjugación del anticuerpo o del antígeno con un enzima(peroxidasa, fosfatasa alcalina...). El anticuerpo conjugado a la enzima se emplea en los ensayos directos e indirectos, sandwich, etc. El antígeno marcado se emplea en ensayos de competición de antígeno.* Unión del antígeno (o del anticuerpo) a los pocillos. La unión de anticuerpos o antígenos se realiza con facilidad a la superficie de plásticos tratados que tienen gran afinidad por proteínas.* Formación de una o más capas de inmunocomplejos. En el caso del antígeno unido a la placa se puede detectar mediante un anticuerpo anti-antígeno marcado (ELISA directo) o empleando un anticuerpoprimario anti-antígeno y un secundario anti primario marcado (ELISA indirecto). Este segundo método permite la amplificación de la señal al poderse unir uno o más anticuerpos secundarios a cadaanticuerpo primario. En el caso del anticuerpo unido a la placa se incuba con una mezcla de antígeno y antígeno marcado. Se ensayan diferentes relaciones de antígeno frío frente a una cantidad fija de...