enfermedades micoticas

Hoja de Investigación:
Como se realizan preparaciones en fresco y tinciones de distintas especies de hongos?
Preparaciones en fresco:
1. Observación directa al fresco con líquidos clarificantes (KOH 10-20%, lactofenol) para pesquisa de levaduras e hifas.
2. Cultivos de hongos en agar Sabouraud glucosado, con o sin antibióticos, con y sin ciclohexamida, en que se consideran tiempo dedesarrollo, características macroscópicas y microscópicas (hifas y esporas), estudios de fermentación (zimograma) y utilización de carbono (auxonograma).
3. Estudio histológico: biopsias con tinciones especiales, como Gomori Grocott (impregnación argéntica).
4. Inmunodiagnóstico.
5. Detección de antígenos capsulares, de pared fúngica, etcétera; son pruebas sensibles y una buena alternativa frente acultivos que requieren períodos de incubación prolongados.
6. Detección de anticuerpos: IgG, IgM con técnicas de inmunodifusión o con técnicas de anticuerpos marcados: ELISA e inmunofluorescencia.
7. Técnicas de biología molecular: hibridación de ADN, PCR, etcétera.
Tras el cultivo, la identificación es diferente en los hongos filamentosos y en los levaduriformes. Los primeros se identifican porlas características de las colonias, sobre todo el color, textura y velocidad de crecimiento, así como por el aspecto de las esporas y conidios que puedan formarse.
La identificación de los hongos levaduriformes se basa en el estudio microscópico de las cepas para observar algunas características diferenciales (p. ej., cápsulas, clamidoconidios o tubos germinales) y en la realización de pruebasde fermentación y asimilación de diversos azúcares.









TINCIONES:
1. Colocar una gota de colorante en el centro de un portaobjetos.
2. Tomar una pequeña porción del cultivo con un asa estéril y colocarla sobre la gota del colorante, extendiendo la preparación cuidadosamente con un par de agujas de disección.
3. Cubrir con un cubreobjetos
4. Observar al microscopio con menor ymayor aumento (objetivos 10x y 40x)
Solución salina y azul de lactofenol - Candidiasis pseudomembranosa
Tinciones de Gram - Células levaduriformes
Fluorocromos
Ácido peryoidico de Schiff PAS - Hifas y blastosporas


Safranina:
útil para el estudio de cultivos y productos biológicos líquidos.
Los elementos fúngicos se tiñen de color rojo intenso y el resto del campo toma untono incoloro o rosa pálido.

AZUL DE ALGODÓN:
El azul de lactofenol tiene tres funciones importantes a la hora de observar hongos del tipo mohos obtenidos por aislamiento o de medio inoculados.
El colorante es fuertemente acido y se usa para la tinción directa del micelio micolico, el cual toma un delicado color azul claro.

Aislamiento y cultivo de muestras obtenidas de la cavidad oralpara evaluar la presencia de hongos del genero Cándida
El Género Cándida comprende más de 150 especies, pero solamente algunas de estas son patógenas para el hombre. Diversas especies pertenecientes al Género producen infecciones en la cavidad bucal, siendo C. albicans la especie más virulenta y la que se halla presente en la mayoría de los casos. No obstante, otras especies del Género Cándidamenos virulentas que C. albicans, también pueden encontrarse implicadas en procesos infecciosos de la cavidad bucal, entre estas: C. tropicalis, C. glabrata, C. parapsilosis, C. kefyr, C. krusei, C. guillermondi, C. famata, C. lusitaniae, entre otras.
Las técnicas de identificación más comúnmente utilizadas comprenden:
1. Estudio morfológico: comprende la evaluación microscópica (presencia oausencia de levaduras, hifas, pseudohifas, tubo germinal, clamidosporas) y macroscópica (color, aspecto, bordes y tamaño de las colonias)
2. Pruebas rápidas: La producción del tubo germinal es una de las pruebas rápidas que nos orienta principalmente hacia la identificación de C. albicans. El ensayo se aplica colocando un pequeño inóculo de la levadura en suero humano, de conejo o ratón, clara de...