Enzimas De Restriccion

Cibertorio Análisis del polimorfismo – Ensayo de enzimas de restricción p.1
Ensayo de enzimas de restricción para analizar el polimorfismo
de globina beta S mediante RFLP
(Práctica en laboratorio virtual Cibertorio)
Fundamento:
La anemia drepanocítica (anemia de células falciformes) se origina por la mutación de un solo nucleótido en
el gen de globina beta humana. Esto genera en lapoblación un polimorfismo, definido por la presencia del alelo
normal o el mutado, en cada uno de los dos cromosomas 11 homólogos.
Pretendemos estudiar el posible diagnóstico genético de esta enfermedad a través de un polimorfismo
RFLP, es decir, mediante restricción y electroforesis.
Como material de partida disponemos de muestras de DNA (virtuales) correspondientes a una parte de esegen, para las dos variantes (normal, AA o WW, y drepanocítica, SS).
Por lo tanto, vamos a estudiar un locus que corresponde a una parte del gen de globina beta y que contiene
el punto polimórfico.
Más información (no necesaria para la práctica):
Concretamente, las muestras comprenden el exón 1, el intrón A, el
exón 2 y parte del intrón B.
Recuerda que el polimorfismo se sitúa en el exón1.
Aclaración de la nomenclatura:
A la hemoglobina normal del adulto, α2 β2 , se la llama habitualmente
hemoglobina A; de ahí el nombre A para el alelo normal de la globina beta aquí
estudiado. También se representa como W, de wild type (tipo salvaje o silvestre).
La hemoglobina de las células falciformes (sickle cells), α2 β
S
2 , se denomina
hemoglobina S.
A lo largo de lapráctica tendrás que conservar información para pasarla de una ventana a otra del programa;
utiliza para ello el “Bloc de Notas” de Windows. Conviene que añadas tus propios comentarios para identificar la
información que vas guardando; puedes imprimirlo al acabar, para llevarte toda la información e incluirla en tu
cuaderno de prácticas.
Ayuda para copiar y pegar texto: utiliza el menú queaparece al pulsar el botón derecho del ratón o, con el
teclado, pulsa Ctrl+C para copiar y Ctrl+V para pegar.
Bibliografía:
• J. Luque y A. Herráez (2001) Texto Ilustrado de Biología Molecular e Ingeniería Genética, págs.
381-383. Ediciones Harcourt / Elsevier España, Madrid.
Cómo comenzar:
El laboratorio virtual funciona dentro de una página web, por lo que debes comenzar abriendo elnavegador
de internet (Internet Explorer o Firefox).
Una vez que se abra el programa, debes buscar la página de Cibertorio:
Puede estar en los “Favoritos” o “Marcadores”; si no, visita http://biomodel.uah.es/lab/cibertorio/Cibertorio Análisis del polimorfismo – Ensayo de enzimas de restricción p.2
Ensayo:
búsqueda de una enzima de restricción adecuada para detectar el polimorfismoObjetivo:
Encontrar una enzima de restricción que corte de forma diferente los alelos normal (W o A) y mutado (S) del
gen de globina beta.
Materiales virtuales:
Software:
• Laboratorio virtual de biología molecular “Cibertorio”
Reactivos virtuales:
• Enzimas de restricción (deben comprarse en BobCo
TM
, como se explica más adelante)
• Grupo de muestras para diagnóstico genético(también comprado en BobCo
TM
), que contiene las siguientes
muestras de DNA:
• DNA del gen de globina β de una persona homocigótica normal (representada como AA o WW).
• DNA del gen de globina β de una persona homocigótica falciforme (representada como SS).
• Cuatro muestras de DNA de pacientes cuyo genotipo se pretende averiguar (designadas Pt1, Pt2, Pt3 y Pt4);
en esta práctica no lasusaremos.
• Marcador de masa molecular de DNA (gratuito, de BobCo
TM
(
• Tampón universal de restricción 10x (gratuito, de BobCo
TM
(
• Agua
• Puntas de pipeta amarillas, capacidad de 1 a 100 µL
• Agarosa
• Tampón de electroforesis TBE (Tris/Borato/EDTA)
• Bromuro de etidio
• Colorante de carga de muestras en el gel (contiene azul de bromofenol, xileno-cianol y glicerol)...