Espectofotometria y pruebas
Páginas: 13 (3216 palabras)
Publicado: 2 de junio de 2014
La Espectrofotometría
Es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y bioquímicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.
CURVA DE CALIBRACIÓN:
Uno de los métodos másutilizados para determinar la concentración de una muestra problema, es el método de la curva de calibración. Esta curva de calibración es una gráfica que relaciona la concentración de al menos cinco soluciones de estándar de concentraciones conocidas, con la absorbancia de cada uno de ellos a la longitud de onda máxima
Una vez obtenida la gráfica se determina la función matemática quepresenta dicha recta a través del tratamiento estadístico de regresión de los mínimos cuadrados, la cual relaciona la absorbancia y la concentración de un analito.
La siguiente ecuación matemática corresponde a dicha función:
A = m c + n
A: Absorbancia. n : Intercepto de la recta
m: Pendiente de la recta y que corresponde al producto entre absortividad a de lamuestra y el espesor b de la cubeta.
Luego se mide la absorbancia de la solución problema y se interpola su valor en la gráfica o se reemplaza en la ecuación (1), para obtener el valor de concentración del analito. La concentración de la solución problema debe estar comprendida en el rango de concentración que comprende la curva de calibración. Si la concentración de la solución problemaes menor que la concentración del estándar más diluido, debe usarse el método de adición estándar, que consiste en adicionar un volumen determinado de un estándar concentrado a la solución problema, antes de realizar la lectura y que permite que esta lectura este dentro de las obtenidas para la curva de calibración. En el caso contrario, si la concentración del analito es mayor que laconcentración del estándar más concentrado la solución problema deberá ser diluida.
Al hacer la curva de calibración, se debe emplear la longitud de onda de máxima absorbancia (λmax.), para obtener una recta con la máxima pendiente y así tener mayor sensibilidad y precisión al hacer las mediciones.
La medición de la absorbancia de la solución problema debe hacerse a la misma longitud de onda que fuehecha la curva de calibración.
POOL SERICO:
En la práctica clínica el estudio de las enzimas séricas es muy importante para el diagnóstico, control y comprensión de una gran variedad de patologías.
Las enzimas que se encuentran en el plasma pueden dividirse para su estudio en dos grupos:
- Enzimas funcionales:
Tienen una función definida y específica en este medio, por lo que elplasma constituye su sitio normal de acción, y su concentración plasmática es equivalente o mayor que la del tejido donde se producen. A este grupo pertenecen la seudocolinesterasa, ceruloplasmina, lipoproteinlipasa, así como las enzimas que intervienen en la coagulación
- Enzimas no funcionales:
No tienen una función conocida en este medio, ya sea porque no dispone de la cantidad necesariade sustratos, cofactores o activadores a nivel plasmático porque su concentración plasmática es considerablemente menor que los niveles titulares. Su presencia en plasma en niveles más altos de lo normal sugiere un aumento en la velocidad de destrucción celular y tisular
ESTAS ENZIMAS PUEDEN DIVIDIRSE EN DOS GRUPOS:
- Enzimas de secreción:
se producen en glándulas exócrinas, comopáncreas y próstata, así como en tejidos como mucosa gástrica y hueso.
- Enzimas del metabolismo intermedio:
La concentración tisular de estas enzimas es miles de veces más alta que en el plasma. El daño puede conducir a un aumento en la permeabilidad de la membrana plasmática con su consecuente liberación a la circulación general.
SANGRE CAPILAR
Es la recolección de una muestra de sangre...
La Espectrofotometría
Es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y bioquímicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.
CURVA DE CALIBRACIÓN:
Uno de los métodos másutilizados para determinar la concentración de una muestra problema, es el método de la curva de calibración. Esta curva de calibración es una gráfica que relaciona la concentración de al menos cinco soluciones de estándar de concentraciones conocidas, con la absorbancia de cada uno de ellos a la longitud de onda máxima
Una vez obtenida la gráfica se determina la función matemática quepresenta dicha recta a través del tratamiento estadístico de regresión de los mínimos cuadrados, la cual relaciona la absorbancia y la concentración de un analito.
La siguiente ecuación matemática corresponde a dicha función:
A = m c + n
A: Absorbancia. n : Intercepto de la recta
m: Pendiente de la recta y que corresponde al producto entre absortividad a de lamuestra y el espesor b de la cubeta.
Luego se mide la absorbancia de la solución problema y se interpola su valor en la gráfica o se reemplaza en la ecuación (1), para obtener el valor de concentración del analito. La concentración de la solución problema debe estar comprendida en el rango de concentración que comprende la curva de calibración. Si la concentración de la solución problemaes menor que la concentración del estándar más diluido, debe usarse el método de adición estándar, que consiste en adicionar un volumen determinado de un estándar concentrado a la solución problema, antes de realizar la lectura y que permite que esta lectura este dentro de las obtenidas para la curva de calibración. En el caso contrario, si la concentración del analito es mayor que laconcentración del estándar más concentrado la solución problema deberá ser diluida.
Al hacer la curva de calibración, se debe emplear la longitud de onda de máxima absorbancia (λmax.), para obtener una recta con la máxima pendiente y así tener mayor sensibilidad y precisión al hacer las mediciones.
La medición de la absorbancia de la solución problema debe hacerse a la misma longitud de onda que fuehecha la curva de calibración.
POOL SERICO:
En la práctica clínica el estudio de las enzimas séricas es muy importante para el diagnóstico, control y comprensión de una gran variedad de patologías.
Las enzimas que se encuentran en el plasma pueden dividirse para su estudio en dos grupos:
- Enzimas funcionales:
Tienen una función definida y específica en este medio, por lo que elplasma constituye su sitio normal de acción, y su concentración plasmática es equivalente o mayor que la del tejido donde se producen. A este grupo pertenecen la seudocolinesterasa, ceruloplasmina, lipoproteinlipasa, así como las enzimas que intervienen en la coagulación
- Enzimas no funcionales:
No tienen una función conocida en este medio, ya sea porque no dispone de la cantidad necesariade sustratos, cofactores o activadores a nivel plasmático porque su concentración plasmática es considerablemente menor que los niveles titulares. Su presencia en plasma en niveles más altos de lo normal sugiere un aumento en la velocidad de destrucción celular y tisular
ESTAS ENZIMAS PUEDEN DIVIDIRSE EN DOS GRUPOS:
- Enzimas de secreción:
se producen en glándulas exócrinas, comopáncreas y próstata, así como en tejidos como mucosa gástrica y hueso.
- Enzimas del metabolismo intermedio:
La concentración tisular de estas enzimas es miles de veces más alta que en el plasma. El daño puede conducir a un aumento en la permeabilidad de la membrana plasmática con su consecuente liberación a la circulación general.
SANGRE CAPILAR
Es la recolección de una muestra de sangre...
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