Espectofotometria

Universidad Católica de la Santísima Concepción Facultad De Medicina Departamento de Bioquímica.

Alumnos: Salgado

Paula Rozas Karina Romero Miguel

Felipe Sobrazo Profesores Encargados: Dr. Reginald del Pozo BQ Javier Grandón BQ Mirna Muñoz

QA German Rotter Fecha del Práctico: 28/Marzo/2007 Fecha de Emisión: 11/Abril/2007 Introducción
Los organismos vivos poseen diversos elementos osustancias que se encargan del desarrollo pleno de la célula (unidad estructural de los seres vivos), entre los cuales encontramos los metabolitos, la sangre, el plasma, enzimas y otros. Los cuales, a su vez, por el hecho de ser tan vitales para ésta llaman la atención de investigadores, científicos o bioquímicos. Sin embargo es necesario cuantificar y cualificar estas sustancias para su óptimoestudio, y es así como se han desarrollado diversos instrumentos o técnicas para el análisis de aminoácidos u otros analitos, entre los cuales encontramos la electroforesis, la cromatografía o la espectrofotometría. Esta última la técnica que desarrollaremos en el presente trabajo de laboratorio. La espectrofotometría es un método que nos permite identificar y cuantificar sustancias puras o enmezclas a partir de la luz absorvida por un determinado sistema químico, todo esto llevado a cabo gracias a un espectrofotómetro. El cual es un instrumento que proyecta un haz de luz monocromática a través de una muestra y mide la cantidad de luz que es absorvida por dicha muestra, comparando la longitud de onda emitida por el espectro con la que llega al fotodetector. En el presente trabajo se analizóen primera instancia una solución madre albúmina de 10 mg/ml, tratada con el método de Biuret, como analito para posteriormente realizar una curva de calibración estándar con los resultados obtenidos. Posteriormente se realizó el mismo procedimiento de espectrofotometría en una solución problema de concentración desconocida (muestra Nº5) tratada también con el método de Biuret, de modo determinarla concentración de aminoácidos de esta muestra problema. A continuación se explicará en detalles como se pudo llegar a conocer la concentración de la muestra problema con la ayuda de éste importante instrumento de laboratorio como es el espectrofotómetro y los distintos procedimientos que realizamos para llevar a cabo esto.

Objetivos
Familiarizarse con las técnicas espectrofotométricas.Determinación cuantitativa de proteínas por el método de Biuret Conocer las diversas utilidades que posee es el espectrofotómetro. Conocer distintos métodos para determinar la concentración de una muestra de concentración desconocida.

Materiales • Reactivos: Muestra proteica problema numero 5 Solución estándar de albúmina 10 mg/ml Reactivo de Biuret (solución de sulfato de cobre 1% en NaOH 14%)Vaso de precipitado de 100 ml Pipeta parcial de vidrio de 2 ml Propipet a para 10 ml y para 2 ml Tubos Kahan Gradilla para tubos Kahan Plumón Vórtex Reloj Cubetas para espectrofotómetro Gradilla para cubetas Micropipeta de 100-1000 ml Agua destilada Espectrofótometro Metertek SP-830

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Método

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Al comenzar nuestro trabajo debemos recordar la manera de usar lasmicropipetas, ya que solo unos microlitos de error nos alterarían todo nuestro resultado. Además hay que tener presente que 500 uL es equivalente a 0.5 mL. Para obtener nuestras muestras debemos realizar algunas disoluciones, para lo cual utilizaremos la siguiente igualdad, y de esta manera sabremos el volumen de la solución de albúmina que necesitamos ocupar: V1 * C1 = V2 * C2

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Como yaconocemos la cantidad de muestra de albúmina que vamos a ocupar el resto del volumen lo debemos completar con agua destilada. Procedimiento que hay que realizar para cada muestra.

Tubo 1 Tubo 2a Tubo 2b Tubo 3 Blanco

Tubo 4 Tubo 5

Tubo6

Tubo 7 Tubo 8

Tubo 1: agua destilada 0.5ml + Reactivo de Biuret 2ml Tubo 2 a y 2 b: Muestra proteica 0.5ml + Reactivo de biuret 2ml Tubo 3: Solución...