Espectrofotometria

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Guía de Trabajos Prácticos 2010

Bioquímica

ENFE 0006

NOMBRE ALUMNO: …………………………………………………………….

INTRODUCCIÓN A PRÁCTICOS DE BIOQUÍMICA

( Antes de cada sesión se debe leer la guía de laboratorio y hacer los ejercicios correspondientes. Al comienzo de cada laboratorio se realizará una prueba de entrada basada en la guía práctica.

( Es obligatorio el uso del delantal en ellaboratorio, quien no lo tenga no podrá realizar el práctico y tendrá nota 1.0 en la prueba y en el informe de ese laboratorio.

( Se trabajará en grupos de 4-5 personas organizadas por afinidad.

( Se deberá realizar informes, según se indique de algunas actividades prácticas, el cual será entregado la semana siguiente a la realización del laboratorio.

NO SE RECIBIRÁN INFORMES ENTREGADOS CONPOSTERIORIDAD.

EL INFORME DE PRÁCTICO BASICAMENTE DEBE CONTENER:

( Nombre del práctico, integrantes del grupo y logo USS.
( Objetivos del práctico.
( Marco teórico.
( Material y métodos: describir con sus palabras la metodología usada.
( Resultados: incluir tablas, gráficos, cálculos y observaciones.
( Discusión y conclusiones: Discutir todos los resultados, conclusiones, e incluir lasrespuestas de los cuestionarios de la guía de laboratorio. Mencionar las referencias bibliográficas consultadas.
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ESPECTROFOTOMETRÍA, CURVA DE CALIBRACIÓN Y DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE BIURET

I. Introducción.

La luz que recibimos desde nuestra fuente natural, el sol, es una compleja mezcla de radiaciones que varían en intensidad y en frecuencia. La formacióndel arcoiris es un claro ejemplo de ello. Para nadie es un misterio que cuando la luz blanca atraviesa un finísimo entramado de gotitas de agua se “rompe” (difracción) en sus múltiples radiaciones que la componen. Un similar efecto ocurre cuando esta luz atraviesa un prisma. Así, entonces, podemos visualizar que la luz originalmente blanca se descompone en una variada gama de colores, desde elvioleta hasta el rojo. Sin embargo, estos “colores” representan sólo una parte de la mezcla de radiaciones que compone la luz. Como podemos verlos, se dice entonces que conforman el “espectro visible de la luz” y son el rojo (alrededor de los 700 nm), naranjo (alrededor de los 650 nm), amarillo (alrededor de los 600 nm), verde (alrededor de los 550 nm), azul (cerca de los 500 nm) y el violeta(alrededor de los 450 nm). Sobre los 750 nm y hasta los 900 nm, aproximadamente, está la zona que corresponde a la radiación infrarroja (IR) y bajo los 400 nm hasta los 200 nm está la zona de la radiación ultravioleta (UV).

En bioquímica existen técnicas de determinación de diversos compuestos orgánicos basadas en sus propiedades fisicoquímicas. Una de ellas consiste en la propiedad de ciertoscompuestos tales como las proteínas, carotenos, ácidos nucleicos e hidratos de carbono, entre otros, de absorber una cierta intensidad de luz en el rango visible o UV del espectro.
Los compuestos que presentan esta propiedad se denominan cromóforos. Dependiendo del tipo de compuesto que se trate se deben considerar parámetros como la concentración de la muestra y la longitud de onda autilizar. La longitud de onda de la luz se expresa generalmente en nanómetros (nm = 1 x 10-9 m) y nos da cuenta de la región del espectro que se está utilizando. En el caso de las proteínas y ácidos nucleicos, estas biomoléculas pueden absorber luz en la región UV y/o visible. Dependiendo de la concentración y del tipo de proteína o ácido nucleico que se trate, se observará una mayor o menor capacidadde absorción de la luz. La mayoría de las biomoléculas no absorben luz visible. Sin embargo, algunas de ellas son coloreadas debido a la presencia de grupos prostéticos (como los grupos hemo de la hemoglobina y la mioglobina) o iones metálicos que le confieren la capacidad de absorción.
Los grupos funcionales que se encuentran en algunas biomoléculas y que permiten que éstas absorban luz...
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