Espectros de la hemo/oxi/carboxihemoglobina

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Determinación de los Espectros Visibles de la Hemoglobina, Carboxihemoglobina, Desoxihemoglobina y Nitrosilhemoglobina

I. Objetivo:

* Obtener la Hemoglobina, Carboxihemoglobina, Desoxihemoglobina y Nitrosilhemoglobina.
* Analizar los espectros visibles de las muestras obtenidas usando un Espectrofotómetro.

II. Fundamento Teórico[1]:

La hemoglobina es una proteínaconjugada, cuyo peso molecular es de 64,458 la cual contiene cuatro grupos hem y globina. Esta última consiste en dos pares (a y b) de cadenas polipeptídicas. Las diversas cadenas se mantienen unidas por acción de fuerzas no colanetes, formando una proteína globulas tridimensional. Es probable que en estas fuerzas intervengan puentes de hidrógeno, uniones salinas e interacciones hidrófobas. Lahemoglobina puede considerarse como una enzima que tienen al oxígeno como uno de sus sustratos. Su reacción con el oxígenos e acompaña de la modificación estructural.

La hemoglobina desoxigenada, que se denomina desoxihemoglobina, tiene una afinidad más bien baja por el oxígeno debido a que los enlaces entrecruzados de los pares de iones de las subunidades de hemoglobina estabilizan las estructurasde las cadenas individuales de modo que la proteína se resite a la fijación al oxígeno.

En la desoxihemoglobina, el hierro está ligeramente fuera del plano del anillo y los seis electrones del orbital del hierro están acomodados como cuatro electrones desapareados y un par de electrones acomodándose los cinco ligandos. Cuando se fija el oxígeno la estructura del hierro cambia y en enlacehierro-histidina se hace más corto, los cuatro enlaces a los átomos de nitrógeno son estirados y el hierro se mueve alrededor acercándose al plano. Una vez que el oxígeno se fija a un hemo, la desorganización de los pares iónicos lleva a un cambio en la estructura cuaternaria, que hace los demás sitios hemo más afines al oxígeno.

La carboxihemoglobina es la unión de hemoglobina y monóxido de carbonoque tiene una afinidad mucho más alta con la hemoglobina que la que tiene el oxígeno (210 veces mayor ). Este se adhiere a la hemoglobina formando un nuevo compuesto: la carboxihemoglobina. Las grandes cantidades de monóxido de carbono en la sangre ocasionan intoxicación por esta misma sustancia, es decir, las cantidades excesivas de carboxihemoglobina en la sangre impiden el transporte deoxígeno, tomando su lugar en los glóbulos rojos. Las reacciones tóxicas que ocasiona la inhalación de óxido de carbono se deben en forma exclusiva a la anoxia de los tejidos, pero esto genera alteraciones texturales como edema, pequeñas hemorragias e infiltración perivascular con necrosis focal. Este gas puede ocasionar daños permantentes en el corazón y el sistema nervioso central. Si lacarboxihemoglobina se detecta oportunamente, puede ser efectivo tratarla con 100% de oxígeno para intentar reemplazar el monóxido de carbono por oxígeno.

Óxido nítrico (ON), es un radical libre gaseoso al llegar al torrente sanguíneo, se inactiva al unirse a Hemoglobina, formando nitrosilhemoglobina la que es oxidada a Metahemoglobina y nitrato.

III. Diagrama de Proceso:

* Preparación de lamuestra:

* Obtención del espectro visible de la hemoglobina
Solución de sangre
Solución de sangre

* Colocar 3ml en la cubeta del espectrofotometro.
* Medir su espectro
* Colocar 3ml en la cubeta del espectrofotometro.
* Medir su espectro

Muestra analizada
Muestra analizada

* Obtención de oxihemoglobina
Solución de sangre
V=10ml

Solución de sangre
V=10ml

*Veter en un tubo de 18x150
* Armar el equipo de la figura1
* Colocar 10g de clorato de potasio y 1g oxido de manganeso en un tubo con brazo lateral
* Introducir la pipeta en el tubo como en la figura.
* Burbujear x 1min y tapar con un corcho.

* Veter en un tubo de 18x150
* Armar el equipo de la figura1
* Colocar 10g de clorato de potasio y 1g oxido de manganeso...
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