Esterilizacion Y Metodos De Cultivos

Unidad 2. Técnicas básicas de microbiología.

Práctica 4. Esterilización y preparación de medios de cultivo
Objetivos Al finalizar este ejercicio el alumno será capaz de:
• Explicar el concepto de esterilización y su utilidad en microbiología • Preparar correctamente el material que se someterá a esterilización
• Aplicar algunas metodologías para esterilizar material y medios de cultivo• Comprobar la efectividad del proceso de esterilización • Explicar el concepto de medio de cultivo en microbiología
• Eliminar adecuadamente los desechos biológicos Introducción Para el estudio de los microorganismos es indispensable contar entre otras cosas con material y medios de cultivo estériles. En Microbiología la esterilización se define como “el proceso mediante el cual se eliminan todoslos microorganismos (incluyendo formas de resistencia) de un objeto, medio o superficie” y su aplicación garantiza la ausencia de microorganismos en el material y medios de cultivo a ser empleados. Existen diversos métodos de esterilización, entre ellos: calor (seco o húmedo), filtración (para sustancias termolábiles y aire), radiaciones y aplicación de gas de oxido de etileno (para jeringas ycajas de plástico) Un medio de cultivo esta constituido por una mezcla de agua y sustancias orgánicas e inorgánicas, los que en conjunto proporcionan los requerimientos nutricionales para el desarrollo de los microorganismos. La composición de los medios de cultivo varía en función de: • grupo microbiano que se pretende estudiar • complejidad química • estado físico • aplicación En general lapreparación de los diferentes medios de cultivo es similar.

1ª sesión
Materiales Material por grupo 2 balanzas granatarias Potenciómetro Soluciones de referencia (pH 4 y 7) 3 espátulas Tiras de papel de 2.5 cm de ancho (para envolver pipetas) Tiras de papel de 20 cm de ancho (para envolver cajas) 4 cestos de metal
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Agua destilada Material por equipo 1 tripie 1 charola metálica para tripié 2matraces de 250 0 300 mL 1 probeta de 250 mL 1 matraz de 500mL 1 varilla de vidrio 1 gradilla 4 aplicadores de madera 2 hisopos 1 pipeta de 10mL 2 pipetas de 1.0mL 2 pipetas de 5mL 4 pipetas Pasteur 30 tubos de 16x150 4 tubos de 22x175 2 tubos de 13x100 4 cajas petri de vidrio Un equipo Millipore 1 indicador biológico de esterilización (tira de papel filtro impregnada con esporas de Geobacillusstearothermophylus Reactivos Caldo Nutritivo Agar-Agar Agar Nutritivo Solución de NaOH 1.0 N Solución de HCl al 10 % NaCl Indicador de azul de bromotimol 1% Solución salina isotónica (garrafón)

Metodología a) Preparación y esterilización de material de vidrio 1. Lavar material con detergente líquido, enjuagar con abundante agua de la llave y al final con agua destilada. 2. Secar el material devidrio de preferencia en horno, si no es posible secar al aire. 3. En las pipetas poner un filtro de algodón en la boquilla y envolver con papel Kraft. 4. Envolver las cajas de Petri y pipetas de acuerdo a las indicaciones del profesor. 5. Introducir los hisopos en un tubo y tapar con algodón. 6. Identificar con nombre y marcar el volumen en el papel de las pipetas. 7. Envolver el equipo milliporepara esterilizar según las instrucciones del profesor. 8. Introducir el material a un horno previamente calentado a 180º C, esperar a que la temperatura se estabilice nuevamente y a partir de este momento dejar 1 hora. 9. De no ser posible emplear el horno, se puede esterilizar el material de vidrio en autoclave.
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b) Preparación de medios de cultivo (ejemplo de preparación con base en caldo) 1.Leer cuidadosamente el membrete del medio de cultivo. 2. Calcular la cantidad necesaria para preparar 160mL de Caldo. 3. Pesar la cantidad calculada del medio deshidratado. Esta operación debe ser rápida para evitar que la humedad del ambiente no afecte el resto del contenido del frasco. 4. Disolver el medio en 100mL de agua y una vez disuelto completar el volumen a 160mL. 5. Ajustar el pH...