Esterilizacion y Preparacion de Medios de Cultivo

PRÁCTICA 2.3 Esterilización y Preparación de Medios de Cultivo
(1ª sesión)
Objetivos
Al finalizar este ejercicio el alumno será capaz de:
 Explicar el concepto de esterilización y su aplicación en microbiología.
 Preparar correctamente el material que se someterá a esterilización.
 Aplicar algunas metodologías para esterilizar material y medios de cultivo.
 Comprobar la efectividad delproceso de esterilización.
 Explicar el concepto de medio de cultivo en microbiología.
 Preparar medios de cultivo con diferente estado físico y explicar la diferencia en el
procedimiento de preparación.
 Eliminar adecuadamente los desechos biológicos.
Introducción
Para el estudio de los microorganismos es indispensable contar entre otras cosas con material y
medios de cultivoestériles. En Microbiología la esterilización se define como “el proceso mediante el
cual se eliminan todos los microorganismos (incluyendo formas de resistencia) de un objeto, medio o
superficie” y su aplicación garantiza la ausencia de microorganismos en el material y medios de
cultivo a ser empleados. Existen diversos métodos de esterilización, entre ellos: calor (seco o
húmedo), filtración (parasustancias termolábiles y aire), radiaciones y aplicación de gas de oxido de
etileno (para jeringas y cajas de plástico).
Un medio de cultivo esta constituido por una mezcla de agua y sustancias orgánicas e inorgánicas,
los que en conjunto proporcionan los requerimientos nutricionales para el desarrollo de los
microorganismos. La composición de los medios de cultivo varía en función de: a) grupomicrobiano
que se pretende estudiar, b) complejidad química, c) estado físico, y d) aplicación.
Materiales
Material por grupo:
Balanzas granatarias
Potenciómetro
Espátulas
Tiras de papel kraft de 2.5 cm de ancho (para envolver pipetas)
Tiras de papel kraft de 20 cm de ancho (para envolver cajas)
Indicador biológico de esterilización (ampolletas o tiras de papel filtro impregnada conesporas de
Geobacillus stearothermophylus)
Agua destilada
Caldo nutritivo o caldo tripticasa soya (medio de cultivo líquido deshidratado)
Gelosa nutritiva o tripticasa soya agar (medio de cultivo sólido deshidratado)
Agar-Agar
Solución de NaOH 1.0 N,
Solución de HCl al 10%
Material por equipo:
Tripie
Charola metálica para tripié
Matraz Erlenmeyer de 50 mL
Matraz Erlenmeyer de 250 o 300mLProbeta de 100 o 250 mL
Varilla de vidrio
Gradilla
Pipeta de 10 mL
Pipetas de 1.0 mL
Pipetas Pasteur (esterilizar para la siguiente clase)
Tubos de ensayo de 16x150
Tubos de ensayo de 22x175
Hisopos (palitos de madera con algodón)
Material que deben tener los alumnos:
Mecheros
Piseta
Papel kraft o de estraza
Maskin-tape
Clips
Plumones indelebles de punto grueso
Cestos o latasmetálicas (frutas en conserva, 350 g)
Metodología
a) Preparación y esterilización de material de vidrio.
1. Lavar material con detergente líquido, enjuagar con abundante agua de la llave y al final con
agua destilada.
2. Secar el material de vidrio de preferencia en horno, si no es posible secar al aire.
3. En las pipetas de 1.0 mL colocar (con un clip) un filtro de algodón en la boquilla.
4.Envolver las cajas de Petri y pipetas con papel kraft de acuerdo a las indicaciones del
profesor.
5. Introducir los hisopos en un tubo de 22x175 y tapar con algodón.
6. En el papel de la envoltura identificar con nombre y marcar el volumen de las pipetas.
7. Introducir el material en un horno previamente calentado a 180ºC, esperar a que la
temperatura se estabilice nuevamente y a partir deeste momento contar el tiempo de
esterilización (1 hora).
b) Preparación y esterilización de medios de cultivo.
Medio de cultivo líquido
1. Leer cuidadosamente el marbete del medio de cultivo deshidratado.
2. Calcular la cantidad necesaria para preparar 100 mL de caldo del medio de cultivo
deshidratado (ver figura 1).
3. Pesar la cantidad calculada del medio deshidratado. Esta operación...