Esteroles

CONSEJO

COI/ T.20/ Doc. nº 10/Rev. 1
2001

OLEICOLA
INTERNACIONAL

ESPAÑOL
Original: INGLÉS

Príncipe de Vergara, 154 – 28002 Madrid – España Telef.: +34 915 903 638 Fax: +34 915 631 263 - e-mail: iooc@internationaloliveoil.org - http://www.internationaloliveoil.org/

MÉTODO DE ANÁLISIS
DETERMINACIÓN DE LA COMPOSICIÓN Y DEL CONTENIDO EN ESTEROLES
MEDIANTE CROMATOGRAFÍA DE GASESCON COLUMNA CAPILAR

1.

OBJETO

El presente método describe el procedimiento para la determinación del contenido en
esteroles individuales y totales de las materias grasas.
2.

PRINCIPIO DEL MÉTODO

Saponificación de la materia grasa, a la que se habrá añadido á-colestanol como patrón
interno, con una solución etanólica de hidróxido potásico; a continuación, extracción delinsaponificable con éter etílico. Separación de la fracción de esteroles del insaponificable extraído
mediante cromatografía en placa de gel de sílice básica; los esteroles recuperados del gel de sílice
se transforman en trimetisililéteres y se analizan mediante cromatografía de gases con columna
capilar.
3.

MATERIAL

3.1.

Matraz de 250 ml, provisto de refrigerante de reflujo con juntasesmeriladas.

3.2.

Embudos de separación de 500 ml.

3.3.

Matraces de 250 ml.

3.4.

Equipo completo de cromatografía en capa fina, utilizando placas de vidrio de 20 x 20 cm.

3.5

Lámpara ultravioleta de una longitud de onda de 366 o 254 nm.

3.6.

Microjeringa de 100 µl y 500 µl.

3.7.

Embudo cilíndrico filtrante con filtro poroso G3 µm (porosidad 15-40 µm), de 2 cm dediámetro y 5 cm de altura, aproximadamente, con un dispositivo adecuado para la
filtración en vacío y una junta esmerilada macho 12/21.

3.8

Matraz cónico para vacío de 50 ml, con junta esmerilada hembra 12/21 acoplable al
embudo filtrante (3.7.).

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3.9.

Probeta de 10 ml de fondo cónico con tapón hermético.

3.10.

Equipo de cromatografía de gases quepueda funcionar con columna capilar, formado por:

3.10.1. Horno para la columna, que pueda mantener la temperatura deseada con precisión de
C.

±1

0

3.10.2. Inyector termorregulable con insert en vidrio persilanizado y divisor.
3.10.3. Detector de ionización de llama y electrómetro.
3.10.4. Registrador-integrador que pueda funcionar con el convertidor-amplificador (3.10.3), con
untiempo de respuesta no superior a 1 segundo y con velocidad de papel variable..
3.11

Columna capilar de vidrio o sílice fundida, de 20 a 30 m de longitud y de 0,25 a 0,32 mm
de diámetro interno, recubierta interiormente de fase estacionaria SE 52 ó SE 54 o
equivalente, con un espesor uniforme que oscile entre 0,10 y 0,30 µm.

3.12

Microjeringa de 10 µl para cromatografía de gases, conaguja endurecida.

4.

REACTIVOS

4.1.

Hidróxido potásico, solución etanólica 2N aproximadamente: disolver, enfriando al mismo
tiempo, 130 g de hidróxido potásico (valoración mínima del 85%) en 200 ml de agua
destilada y completar hasta un litro con etanol. Conservar la solución en botellas de vidrio
oscuro bien cerradas (etanol 95 % v/v).

4.2.

Eter etílico de calidad paraanálisis.

4.3.

Sulfato sódico anhidro de calidad para análisis.

4.4.

Placas de vidrio recubiertas con gel de sílice, sin indicador de fluorescencia, de 0,25 mm de
espesor (disponibles en el comercio ya preparados para el uso).

4.5.

Hidróxido potásico, solución etanólica 0,2 N: disolver 13 g de hidróxido potásico en 20
ml de agua destilada y completar hasta un litro con etanol.

4.6.Tolueno para cromatografía (5.2.2.).

4.7.

Acetona para cromatografía (5.2.2).

4.8.

Hexano para cromatografía (5.2.2).

4.9.

Eter etílico para cromatografía (5.2.2).

4.10.

Cloroformo de calidad para análisis (5.2.2).

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4.11.

Solución patrón para la cromatografía en capa fina: colesterol o fitosteroles, solución al 5%
en el...