experimento de cationes




SOTO CALDERON ZOILA
PALLAROZO GARCIA NAYSHA
OLORTEGUI MORALES YANELA
PUNTILLO SOLANO DENNI

GLUCOLISIS EXPERIMENTAL
I. GENERALIDADES
La mayor parte de los átomos de carbono de los alimentos ingeridos por los animales. Es excretado como co2. Más de los 2/3 de estos átomos de carbonos aparecen como grupos acetilo durante los estados intermedios de su conversión a co2. Durante elmetabolismo los grupos acetilos se unen como tioesteres a la coenzima A, un tiol que tiene la función que tiene la función de transportar grupos acilo dentro de la célula.
La ruta fundamental por la que ocurre el catabolismo de la glucosa en la mayor parte de las células, está constituida por una serie de reacciones que convierten a este azúcar en piruvato (CH3-CO-COOH). Cetoacido que se forma enel citoplasma. De esta ruta se valen la generación de ATP en un medio anaeróbico (músculos esqueléticos); además esta ruta es el preludio para el ciclo de Krebs, en donde se va a dar la combustión completa de la glucosa.
La utilización de fosfatos en la síntesis de piruvato permite alcalinizar el medio. Inhibiendo de este modo la piruvato descarboxilasa la que traerá como consecuencia laacumulación del mismo. Las reacciones que se utilizan para su determinación identifican al grupo carbonilo (ceto) del piruvato.

II. OBJETIVOS
Sintetizar piruvato por la fermentación de la glucosa.
Determinar la presencia del piruvato mediante los métodos del nitroprusiato y dinitrofenilhidragina.

III. MATERIALES Y REACTIVOS
Glucosa 10%.
Fosfato de sodio dibasico 0,5M.
Suspensión de levadura enKHPO (100g/l).
Suspensión de levadura en NaOH (100g/l).
Nitroprusiato de sodio al 5%.
Sulfato de amonio sólido.
Hidróxido de sodio al 10%.
Hidrocloruro de 2,4 dinitrofenilhidrazina (sat. En HCl 2M).
Ácido tricloroacetico (ATC).



IV. PROCEDIMINETO
A.1.- OBTENCION DEL PIRUVATO: siga las indicaciones del siguiente cuadro.

Reactivos
Tubo 1
Glucosa ml
5
Levadura en Na2HPO4
5Incubar a 37° durante 1 hora

Ac. Tricloroacetico
2


Mezclar vigorosamente
Centrifugar por 10 minutos a 2500 r.p.m.
Separar el sobrenadantes en dos tubos y marcarlos
Hervir en vaso chico
B.2.- DETERMINACION DEL PIRUVATO
1. con nitroprusiano de sodio al 5% (preparado en el momento) con el tubo hervido.
Colocar 1g de sulfato de amonio.
Añadir 2 ml del sobrenante.
Agregar 2gotas de nitroprusiano de sodio al tubo y mesclar vigorosamente.
Por las paredes del tubo añadir lentamente amoniaco hasta formar dos capas.
La formación de un anillo de color verde o azul indica la presencia de piruvato.
2. con 2,4-dinitrofenilhidrazina (tubo sin hervir)
En un tubo colocar 2ml del sobrenante.
Añadir un ml de la solución saturada de 2,4 dinitrofenilhidrazina.
Mezclarvigorosamente.
En un tubo marcados colocar 3 gotas de los tubos y añadir 1 ml. De hidróxido de sodio al 10%.
El color rojo indica la presencia de piruvato.

Solución/tubos
A
ml de glucosa 10%
5
ml de suspensión de levadura en Na2PO4
5

Colocar en baño maría a 37° por una hora
Agregar ml TPA
2

Mezcla, centrifugar a 2,500 r.p.m. por 10 minutos y separar los sobrenadantes para el análisis delpiruvato.
Obtención del piruvato

Procedimiento:
Preparado del PO4HNa2 al 0.5M
Primero sacamos la masa molecular del PO4HNa2.
Su masa molecular es : 142
Luego relacionamos
* 142 1000 ml 1M
* 142 1M
X 0.5 MX = 72 g
* 72 g 1OOO ml
Y 20 ml
y = 1.44 g
Luego de estos cálculos pesamos 1.44 g de PO4HNa2. Y lo diluimos en 20 ml de agua destilada....