Exposición sobre amilasas

Recomendaciones para la determinación de isoenzimas de la a-amilasa en suero sanguíneo humano.
3.Melodosdedeterminaciondeisoenzimas
Schandesarrolladogrannumerodemetodosparascparar
ymcdirlaconcentraci6ndelas isoenzimasdela a-amilasa
basandoseen las diferenciasfisico-quimicas yantigcnicas
deambasisoenzimas. Consistenfundamentalmenteen:separaci6nelcctroforetica,isoelcctroenfoque,cromatografia
en columnaeinhibici6n selcctiva.
3.1 Electroforesis
Ladeterminaciondelas isoenzimasdelaa-amilasamediante
c1ectroforesissebasaenla separacionenfunciondesucargasobrediferentessoportes:acetatodeeelulosa,agarosa0
poliacrilamida.Posteriormente,sedeterminala concentraci6ncataliticadela a-amilasapordiferentesmctodosyse
euanlificaeI colorformado en la reacci6neatalizadamedianteespcetrometrfadeabsorcionenfases61ida.EIproccdimientodemedidaconazuldeCibachronunidoaalmid6ncomosustratoescI masutilizado.
Estemctodopermitela separacioncomominimodelas
dosisoenzimas.salivalypancreatica.asicomodeunmayor0 menornumerodeformas multiplesseguneI scpone
utilizado.Mediantec1cctroforesisena,garosasehanseparadohastanueveformas molecularesdistintas:5pancrealicasy4salivales(12).
Lapresenciademacroamilasasepuededetectarmediante electroforesisenagarosa0enacctalOdecelulosadebido
asu posici6nmigratoriainusual en estossistemas (7). El
complejodemacroamilasaapareceenla eleclroforesisen
agarosacomounabandadifusaqueenalgunasocasiones
puederesultardificildedistinguirdelrestodeformas moleculares dela a-amilasapresentesen suero (/3,14).Laelcrtroforcsiseselunicomctododisponiblequepermitedistingui-
rla forma PJ
, aunquepresenteel inconvenientedela superposici6n debandascon la isocnzima
salivalmayoritariaensuero,con10queladetcccionycuanlificacion delaforma PJ TCSultadificiLSinembargo,sehan
descritodiversasmetodologiaspararesolvermejorla separaci6n entreestasformas molcculares(8,15).
Losmctodoselcctroforcticossonrelativamentesencillos....