Expresión De Genes Quiméricos Transferido En Las Células De Plantas Usando Un Vector Derivado De Plásmido Ti.

Expresión de genes quiméricos transferido en las células de plantas usando un vector derivado de plásmido Ti.
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No se expresan los genes extranjeros introducidos en las células vegetales con vectores del plásmido Ti. Hemos construido un vector de expresión derivado de la secuencia promotora de nopalinasintasa y se han insertado las secuencias de codificación de un gen de acteiltransferasa de cloranfenicol y el gen de la octopina sintasa en este vector. Estos genes quiméricos se expresan funcionalmente en las células vegetales después de su transferencia a través de un plásmido Ti de Agrobacterium tumefaciens.
La agalla de cuello en plantas dicotilededeas porducida por Agrobacterium tumefaciens esel resultado de un segmento (llamado Región-T) del plásmido Ti en el DNA cromosómico de las células vegetales (para revisión ver refs 1-4). La inserción de secuencias de ADN foráneo dentro de la región T de plásmidos Ti dirigida a su co-transfer y su integración en el genoma de planta5. Hasta la fecha, inserciones de hasta 50 kb han sido correctamente co- transferidas con el T-ADN (resultados nopublicados de este laboratorio). El límite superior del tamaño de los segmentos de ADN que pueden transferirse a la planta de genomas con este sistema no ha sido determinado. La región de T (o T-ADN) transferidos se expresa en células de la planta6 y codifica para varias polimerasa del hospedero en transcritos ll-dependientes poliadenilados 7-10. Algunas de estas transcripciones demostraron serresponsable del modo de crecimiento de los tumores de las células vegetales transformadas, mientras que otras codificaron para enzimas que sintetizan nuevos compuestos (llamados opinas), que son aminoácidos derivados de ácido o azúcar. No se ha comprobados que alguno de estos transcrito sea era esencial para la transferencia de ADN-T 11-13.
Para comprender el mecanismo por el cual los genesT-ADN ligados se expresan en plantas, la secuencia de nucleótidos y la ubicación precisa de los extremos 3' y 5' en la transcripción de dos diferentes genes de opinas sintasa se determinaron, el gen de la octopina sintasa llevado por pTiB6S3 (ref. 14) y el del nopalina sintasa llevados por pTiT37 (refs 15,16). Aunque ambos genes están codificadas por plásmidos de origen bacteriano, mostraron quecomparten más características con genes eucariotas que con genes procariotas. Ambos genes de octopina y nopalina sintasa, nombrados ocs y nos respectivamente, tienen una secuencia similar a la llamada 'TATA' o caja 'Goldberg-Hogness' 17 en la región 5’ río arriba del comienzo de la transcripción y la secuencia 'AATAA' similar a la señal de poliadenilación de genes eucariotas, cerca del final 3'18,19
Los genes de opina sintasa proporcionan herramientas útiles para estudiar la expresión de genes en las células vegetales, porque son constitutivamente expresables en células del tumor, así como en todos los tejidos de plantas regenerado de células con T-ADN-transformado 20,21 . De importancia práctica es el hecho de que han sido desarrollados estudios muy rápidos y sensibles para ladetección de nopalina y octopina 23,23.
Se han desarrolado varios intentos para expresar un número de bacterias, animales y algunos genes de plantas no relacionadas (por ejemplo, leghemoglobina) introducido e integrado en el genoma de tabaco con el uso de vectores del gen del plásmido Ti 24, que hasta ahora han fallado (resultados no publicados de este laboratorio), debido a que estos genes foráneos nofueron transcritos en las células transformadas de tabaco. Esta falta de expresión fue atribuida al hecho de que la maquinaria de transcripción de la planta pudo reconocer las señales de las señales del inicio de la transcripción (secuencias promotor) por estos genes foráneos.
Para superar la barrera potencial de la expresión de genes extranjeros en plantas, hemos construido un número de...