extracción ADN bacteriano

Extracción ADN bacteriano
El primer paso para la extracción de los genes de una bacteria es causar una lisis de una célula de la bacteria de la cual se desea extraer el ADN, para esto se utilizandetergentes aniónicos. También se deben utilizar conservantes que no dejen que las DNAsas que existen en la célula o que contaminantes del medio dañen el ADN, si esto pasara se podría comprometer elresultado buscado. Debido a que en la célula también hay ARN, que debe ser eliminado, se utilizan RNAsas. Para eliminar las proteínas y demás elementos que existen en la célula se utiliza la técnica deprecipitación salina. Finalmente se rehidrata el ADN en una solución que contiene alcohol
Para lograr la lisis celular primero se debe colocar la suspensión bacteriana en la centrífuga para que lascélulas se precipiten. Después se debe eliminar el sobrenadante para luego ser colocada, la muestra, en la incubadora a una temperatura de ochenta grados centígrados por 5 minutos para lograr lalísis celular. Para eliminar el ARN se coloca la RNAsa en la solución, se mezcla bien y se incuba a treinta y siete grados centígrados por quince a sesenta minutos. Para obtener el ADN se necesita decantarel sobrenadante que es donde está el ADN y se agrega isopropanol, el resto puede ser eliminado. Después se centrifuga durante un minuto la muestra, en este punto el ADN debería ser visible como unprecipitado blanco. Se elimina el sobrenadante y a este resultado se agrega etanol al setenta porciento. Se centrifuga por un minuto y se decanta el etanol. A continuación se debe rehidratar el ADN y sepuede lograr calentando la muestra a sesenta y cinco grados centígrados por una hora. Se vierte la muestra de ADN en agar para poder ser visualizado mediante electroforesis. Finalmente se hace laelectroforesis entre una o dos horas y se observa la muestra con luz ultravioleta.

Bibliografía:
Dorado Pérez Gabriel, departamento de bioquímica y biología molecular Campus Universitario de...