Extracción de ADN




INTRODUCCIÓN

El presente reporte de laboratorio demuestra como extraer el ADN (Ácido Desoxirribo Nucleico) a partir de una muestra sanguínea humana. Como ya sabemos, la estructura de la célula eucariota tiene la concentración de ADN en su nucléolo; Para que el equipo de laboratorio pudiera observar las muestras de ADN fue necesario romper la estructuras con confinan elcitoplasma y los demás orgánulos para liberar el medio de su contenido.
Este proceso será necesario en el área de la salud, ya que como médicos tendremos la necesidad de recurrir a ciertos exámenes para descubrir el origen de ciertas anomalías genéticas o por un lado más simples, el hecho de que un paciente necesite un estudio.
Al concluir la práctica tuvimos la oportunidad de ver, efectivamente elADN extraído de la compañera Génesis.


MARCO TEORICO.
Mucho antes de que los biólogos conocieran la estructura del ADN, supieron que los genes se transportaban en los cromosomas, los cuáles se descubrieron en el siglo XIX como estructuras filamentosas en el núcleo de las células.
´´Los cromosomas fueron observados en células de plantas por el botánico suizo Karl Wilhelm von Nägeli en1842 e, independientemente, por el científico belga Edouard Van Beneden en lombrices del género Ascaris. ´´(Alberts, 2006)
Al comienzo de la década de 1950, se estudió el ADN mediante el análisis por difracción de rayos X, una técnica para la determinación de la estructura atómica tridimensional de una molécula.
´´Los resultados iniciales de difracción de rayos X indicaron que el ADN estabaformado por dos cadenas enrolladas en una hélice.´´ (Alberts, 2006)
El ADN constituye el material genético de los organismos, por lo tanto es el componente químico primario, esta formado por dos cadenas de poli nucleótidos enrolladas alrededor, como ya sabemos la diferenciación entre un nucleósido y un nucleótido, es que el nucleótido cuenta con la presencia del grupo fosfato que se encuentraen contacto con el medio acuoso, a estos grupos se unen pentosas de sacáridos de desoxirribosa, que es un azúcar de 5 carbonos y del grupo funcional carbonilo.
Existen numerosas técnicas para la extracción del ADN, solo varían algunos pasos pero a final todos sirven para la observación del material.


















MATERIALES Y EQUIPO
*Muestra de sangre.
*Micro tubos.*Pipeta semiautomática.
*Puntas para pipeta.
*Gradilla.
*Agua destilada.
*Tris-HCL 10mM y 20mM (pH 7.6)
*Isopropanol.
*EDTA 1mM.
*SDS 0.1% p/v.
*Acetato de potasio 5M.
*Ácido acético glacial.
*Buffer TE.
*Etanol Absoluto.
*Microcentrífuga
METODO.
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
1.-Se tomó una muestra de sangre de la compañera Génesis, de acuerdo a la técnica de venopunción y se colocó enun tubo vacutainer con EDTA (ácido etildiaminotetraacético) como anticoagulante.
2.-Tranferir alícuotas de 300 uL de sangre completa a 2 microtubos .
3.-Adiccionamos 900 uL de buffer de lisis (tiene la función de romper la célula y las membranas nucleares, lo que permite que el ADN se libere) de células rojas a cada tubo.
4.-Mexclar por inversión.

5.-Esperamos por 10 minutos
Paraincubar la solución a temperatura ambiente, mezclando ocasionalmente por inversión.
6.-Centrifugar los tubos a velocidad máxima por 20 segundos a temperatura ambiente.
7.-Retirar el sobrenadante hasta que queden aproximadamente 20 uL en el microtubo.
8.- Re suspender los pellets (Pellet o pelet es una denominación genérica, utilizada para referirse a pequeñas porciones de material aglomerado ocomprimido) celulares en el sobrenadante remanente. Combine el contenido de ambos tubos en uno solo.
EXTRACCIÓN DE LA MUESTRA
1. Transferimos la muestra a un microtubo conteniendo 600 uL de buffer lisis celular frio. Homogenizamos (Hacer que una cosa sea homogénea igualando o haciendo uniformes los elementos que la componen.)la suspensión en el homogeneizador durante 30 segundos. Nota: El SDS...