EXTRACCION ADN

INTRODUCCIÓN

El ADN (acido Desoxirribonucleico) la sustancia química responsable de la transmisión de la información hereditaria todos los organismos celulares y casi todos los virus, este lleva la información necesaria para dirigir la síntesis de proteínas y la replicación.1 La extracción de ADN tiene como objetivo principal obtener la mayor cantidad posible del ADN de alto peso molecular,libre de proteínas, carbohidratos y otros inhibidores de enzimas.2Para extraer el ADN primero es necesario romper las células y luego se necesita separar el ADN del resto de los componentes celulares como proteínas y membranas lipídicas.

En este informe se presentara los resultados obtenidos por todo el grupo del laboratorio al realizar la extracción del material genético de un tejido vegetal(arveja) y determinar la pureza del mismo, con sus respectivos análisis y conclusiones sobre procedimiento realizado.




























OBJETIVOS

• Extraer el material genético (ADN) presente en el tejido vegetal de la arveja.

• Comprender y analizar los procedimientos necesarios para extraer ADN de buena calidad y alta pureza.

• Obtener la mayorcantidad posible de ADN de alto peso molecular libre de proteínas, carbohidratos y otros inhibidores de enzimas.



































METODOLOGÍA

1. Macerar la muestra (arveja)
2. Pesar 70 mg del tejido
3. Adicionar 1 ml de buffer 1
4. Agitar por inversion
5. Centrifugar a 12000 por 5 minutos en frio (4ºC)
6. Descartar sobrenadante
7.Resuspender el sólido agregando 500 μL de buffer 2
8. Incubar a 60 ºC por 10 minutos
9. Adicionar un volumen de cloroformo: alcohol isoamilico 24:1
10. Centrifugar a 5000 rpm / 10 minutos
11. Transferir la fase acuosa a otro tubo
12. Agregar 2 volúmenes de isopropanol frio (-20 ºC) (1.2mL)
13. Centrifugar y eliminar el isopropanol
14. Lavar con Etanol 70%
15. Centrifugar y eliminar el etanol16. Resuspender el precipitado en 300 Tris – EDTA agitar
17. transferir 100 μL de solución y completar a 1000 μL
18. Leer en espectrofotómetro UV a 260 nm y 280 nm.

























DATOS Y RESULTADOS


GRUPO 1 GRUPO 2 GRUPO 3 GRUPO 4
Muestra en mg. Muestra en mg. Muestra en mg. Muestra en mg
69.7 74.2 71.4 71.8
Lectura espectrofotómetro Lecturaespectrofotómetro Lectura espectrofotómetro Lectura espectrofotómetro.
260nm - 0.127 260nm 0.167 260nm - 0.139 260nm - 0.181
280nm - 0.154 280nm - 0.196 280nm - 0.182 280nm – 0.216
Relación: ADN/Proteínas. Relación: ADN/Proteínas. Relación: ADN/Proteínas. Relación: ADN/Proteínas.
0.127/0.154 0.167/0.196 0.139 /0.182 0.181/0.216
0.824 0.852 0.763 0.837
Valor dereferencia 1.8



ANÁLISIS DE RESULTADOS

En la práctica se aisló el ADN del tejido de arveja, por medio del protocolo de extracción; con esto, se buscaba obtener la mayor cantidad de ADN de alto peso molecular, libre de proteínas, carbohidratos y otros inhibidores de enzimas. Para romper la pared celular del tejido vegetal, fue necesario macerar las arvejas, posteriormente llevamos a cabo unalisis con un detergente y algunos reactivos con el fin de separar y descontaminar. El ADN extraído tenia apariencia de pequeños filamentos, esta forma se debe al etanol frío que deshidrata el material genético permitiendo su precipitación; con ello, se logró obtener una apreciable cantidad de precipitado; sin embargo, se hizo necesario redisolver el precipitado en Tris – EDTA (garantizando asíun pH no óptimo para la acción de las ADN asas) por su alta concentración. Luego, se realizó el análisis en espectrofotómetro UV, midiendo la absorbancia de la solución a dos longitudes de onda (λ= 260 nm y 280 nm); esto con el fin de establecer la pureza relativa de la muestra resultante además de cuantificar y/o determinar su posible contaminación con proteínas o solventes en el proceso de...