Extraccion De Adn De Scherichia Coli

OBTENCIÓN DE DNA DE Eschericha coli.

Laboratorio de Biología Celular y Bioquímica I
Departamento de Biología
Facultad de Ciencias Naturales y Exactas
Universidad del Valle
Santiago de Cali-Colombia, 18 de Enero de 2012.

RESUMEN.
El DNA es una macromolécula que consiste de dos filamentos complementarios enrollados sobre un eje, en forma de hélice, a su vez el DNA está estructuradosegún un orden único de bases nitrogenadas soportadas en desoxirribosa, y su función es contener toda la información genética. Se extrajo DNA de un cultivo de Escherichia coli utilizando el método de Marmur modificado. Para la cuantificación de este mismo DNA, se aisló mediante centrifugación y tratamiento con soluciones salinas concentradas, perclorato de sodio y precipitación con etanol. Lo anteriorcon el fin de obtener un extracto purificado y hacerle un análisis espectrofotométrico, aprovechando el complejo coloreado que absorbe a 595nm el cual resulta de la reacción entre la desoxirribosa y la difenilamina en medio ácido, se obtuvo una concentración de DNA hallada con la curva de calibración de 0.0254mg/ml. En la prueba cualitativa con difenilamina se observó un complejo azul el cualdemuestra un resultado positivo con el ADN patrón. De esta práctica de laboratorio se puede concluir que es importante que la fuente de extracción de DNA tenga alto contenido del mismo, y bajo contenido de nucleasas como la desoxirribonucleasa, pues de esta forma se garantiza la obtención del material genético intacto.
Palabras clave: Escherichia coli, extracción de ADN, Lisis enzimática,Difenilamina, Método de Marmur modificado.

INTRODUCCIÓN.
Los ácidos nucleícos son compuestos nitrogenados de elevado peso molecular que se encuentran en las células asociadas con proteínas (plummer, 1981). Los complejos ácidos nucleicos-proteínas se conoce con el nombre de núcleo-proteínas, que pueden separarse en sus componentes (proteína y acido nucleído) al ser tratados con ácidos o conconcentraciones altas de sales. Hay dos tipos de ácidos nucleídos que se hallan en los organismos vivos, acido desoxirribonucleico (DNA) y acido ribonucleico (RNA) (Karp, 2008). La hidrólisis controlada de DNA y RNA produce nucleótidos que pueden considerarse como las unidades básicas de los ácidos nucleícos, estos se encuentran unidos por enlaces fosfodiester y cada uno consta de tres partes: un azúcar, unabase nitrogenada y un fosfato (Plummer, 1981; Karp, 2008).
Los ácidos nucleídos contienen dos tipos de bases nitrogenadas, purinas y pirimidinas. Las dos purinas del RNA y DNA son adenina y guanina. Con respecto a las pirimidinas la citosina es común a RNA y DNA, mientras que el uracilo se encuentra en el RNA, siendo la timina su contrapartida en el DNA (Armstrong et al., 1982).
Para efectuarla extracción de ADN se utiliza la bacteria gran negativa Escherichia coli, esta bacteria posee una sola cadena en espiral de DNA (Romero, 2007). Si se compara el DNA de Escherichia coli, con otros organismos como el ser humano, los ratones, las plantas y otros organismos multicelulares, es relativamente pequeño; consta de 4.638.858 pares de bases. Si se lo estira, la molécula de DNA delcromosoma único tendría 1,6 mm de largo, casi mil veces el largo de la célula de E. coli dentro de la cual reside. Para acomodar esta enorme cantidad de DNA dentro de los limites de una sola célula el DNA de E. coli debe estar muy enrollado y condensado (Pierce, 2010). Gracias a estas características se puede efectuar una extracción de ADN significativa.
Los métodos empleados en el aislamiento del DNAvarían según la naturaleza biológica del material implicado. Los procedimientos para DNA animal, vegetal y bacteriano han sido ampliamente descritos. Para microorganismos en general, uno de los métodos más satisfactorios es el de Marmur, el cual incluye rotura de las células, desnaturalización de restos celulares y separación de RNA seguido de precipitación selectiva de DNA (Davidson et al.,...