Extraccion de ADN

UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO
FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS
INGENIERÍA BIOQUIMICA
INGENIERIA GENETICA

Profesor: Ing. Carlos Rodríguez Ph.DEstudiante: Pablo Andress Salazar Jácome
Semestre: Octavo “U”
Tema: Procedimiento de extracción de ADN genómico de bacterias
1. Tomar una cierta cantidad de biomasa microbiana decultivo puro y disolverlo en 200ul de buffer 1xTE.
2. Congelar la suspensión microbiana a -200 °C por una hora.
3. Transcurrido el tiempo se coloca en un termobloque a 55°C por 20 minutos.
4. Centrifugar la muestra a 16000 rpm, y se retira el sobrenadante quedándonos con la biomasa únicamente.
5. Añadir 200ul de buffer para lisozima con unaconcentración de lisozima de 20ug/ul.
6. Centrifugar a 16000 rpm por 5 minutos, y retirar el sobrenadante.
7. Añadir nuevamente buffer para lisozima con una concentración delisozima de 180ug/ul.
8. Incubar la muestra a 37 °C por 30 minutos.
9. Añadir 20ul de proteinasa K a la muestra , y después someterla al vortex.
10. Añadir 200ul de buffer(Puve Genomik /lisis binding) y someterla al vortex.
11. Incubar a 55 °C por 30 minutos.
12. Añadir 200ul de etanol, vorterizar por 5 segundos.
13. Incubar la solución.14. Centrifugara a 10000 rpm por un minuto.
15. Proceder al lavado del ADN con etanol al 70% y 500 ul de buffer de lavado.
16. Centrifugar a 10000 rpm por un minuto.
17.Agregar 500 ul de buffer 2.
18. Centrifugar a 16000 rpm por tres minutos.
19. Colocar 30 ul de buffer (Puve Link Genomik elution) e incubar a temperatura ambiente por un minuto.20. Centrifugar a 16000 rpm por un minuto.
21. Agregar 30 ul de buffer (Puve Link Genomik elution)
22. Centrifugar a 16000 rpm por 1 minuto 30 segundos, y refrigerar.