Extraccion de dna

Extracción de DNA a partir de Sangre

Introducción

Las pruebas o análisis de ADN (Huella genética) son técnicas de gran importancia no solo en la medicina con análisis forenses y test de paternidad entre otros, si no que también nos permite usar esta información en la filogenia de organismos en estudios ecológicos. Es por eso que las técnicas de extracción cada vez van mejorando para que elanálisis sea aun más certero y confiable.
La purificación del DNA es muy importante ya que puede identificar mutaciones, se puede aislar DNA afectado y compararlo con uno bueno, también se puede clonar genes específicos o fragmentos de cromosomas, se puede ver polimorfismos e identificar agentes patógenos y la resistencia microbiana entre otros resultados que puede mostrar el estudio del DNA (1)Se debe tener en cuenta que es muy importante la fuente de células de las cuales se extrae el DNA, ya que de esto depende la facilidad para la ejecución del procedimiento (V. M. Jewtuchowicz, 2007), Por ejemplo la extracción del DNA de las células del cabello es difícil de separar su DNA pero es muy fácil conseguir el pelo, o la extracción de DNA de leucocitos en la sangre es fácil y ademásse obtiene una considerable cantidad de material genético pero para conseguirlos es más dificultoso. (1)

Para realizar la extracción de DNA se debe conocer muy bien los protocolos ya que hay una discusión entre la buena aplicación y la facilidad de estos (V. M. Jewtuchowicz, 2007), pero la extracción de DNA de sangre periférica con Bromuro de Cetiltrimetilamonio (CTAB) es considerada por muchosla una técnica que reúne los requisitos fundamentales para purificación del DNA, ya que sirve para amplificación por PCR, mostrando una pureza muy alta del material que separa. (1)

Considerando todos los aspectos anteriormente descritos los objetivos planteados para esta práctica son: Familiarizar al alumno con la técnica de extracción de DNA a partir de sangre y detallar las principalesaplicaciones de la técnica teniendo en cuenta las reglas básicas de seguridad química en el laboratorio.

Metodología

Nota: en la práctica se doblaron las volúmenes de todas las soluciones Ej.: se trabajo con 100 µl de sangre y se la resuspendió con 400 µl de CTAB y lo mismo paso con todas las soluciones.

Resultados

Las observaciones de la práctica que se detallan a continuación son vistas delo que ocurre dentro del tubo eppendorf de acuerdo a las reacciones de cada solución y su efecto con el material genético, en los pasos del protocolo ya descrito en la metodología:

Después de haber mezclado la sangre con la solución
de lisis CTAB se procedió a vortexear, y se observo
que en el tubo se formaba una capasuperficial, al
líquido, de espuma y que se liberaba el material
genético precipitando en una fase liquida y de color
rojo.

El cloroformo alcohol isoamílico hizo que el material
genético se separara en el sobrenadante dejando en la
segunda fase a los restos las células sanguíneas,
precipitando elcloroformo. Se recupero el
sobrenadante cuidadosamente en otro tuvo para seguir
con el procedimiento 2

El material genético inmediatamente precipito al
contacto con isopropanol frío y se lo puede distinguir
porque presenta unos pellets que se van fondo del tubo

Después de haber seguido el protocolo, el DNA esconservado hasta que sea necesario el uso de este material genético para la amplificación de las secuencias, en ese momento se realizará la resuspensión con agua tridestilada.

Discusiones y Conclusiones

De acuerdo a Rada y Taboada en su trabajo de métodos y purificación de DNA humano para su aplicación en genética molecular, cada paso del protocolo descrito en la metodología se debe hacer con mucho...