Extraccion De Una Proteina De La Leche

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PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DE CHILE

FACULTAD DE QUÍMICA
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA ORGÁNICA
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CURSO
BIOQUIMICA

SECCION
01

PROFESOR
Jacqueline Alea Pessa

FECHA EJECUCIÓN
16 Agosto de 2010

EXPERIENCIA 1

AISLACION Y PURIFICACION DE UNA PROTEINA DE LA LECHE:
α- LACTOALBÚMINA

ALUMNOPaula Escudero Meza
2° SEMESTRE, 2010

OBJETIVOS

1. Aislar y purificar una proteína de leche descremada Next de Soprole.

2. Observar el efecto de agentes precipitantes sobre la solubilidad de proteínas.

3. Conocer el efecto del pH sobre proteínas tales como caseína y α-Lactoalbúmina.

4. Determinar la concentración deα-Lactoalbumina a través del método de Biuret.

5. Aprender a hacer una curva de calibrado que permita análisis posterior.

RESULTADOS

Cálculos para desarrollo de curva de calibrado: Si la proteína patrón tiene una concentración de 5 mg/mL, se deben sacar la concentración de los tubos de acuerdo a la siguiente fórmula:
| C1V1 = C2V2 |

Donde: C1: Concentración de solución estándar,es decir, 5 mg/mL
V1: Es el volumen de solución estándar
C2: Concentración Incógnita
V2: Suma de volumen de solución estándar + volumen de agua

Despejando se tiene:
C2 = 5 mg/mL * Vol.Sol.Std. (mL)
Vol.Sol.Std. (mL) + Vol. Agua

Tabla 1: Tabla de datos de concentración v/s Absorbancia para solución patrón

|Tubo Nº|Vol. Sol. Std. (mL) |Vol. de agua (mL) |Conc. |Abs |
| | | |(mg/mL) |(540 nm) |
|1 |0,00 |2,50 |0|0 |
|2 |0,25 |2,25 |0,50 |0,036 |
|3 |0,50 |2,00 |1,00 |0,045 |
|4 |0,75|1,75 |1,50 |0,084 |
|5 |1,00 |1,50 |2,00 |0,086 |
|6 |1,50 |1,00 |3,00 |0,162 ||7 |2,00 |0,50 |4,00 |0,137 |
|8 |2,50 |0,00 |5,00 |0,254 |

Grafico 1: Gráfica correspondiente a Concentración v/s Absorbancia de solución estandar deα-Lactoalbúmina.

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Debe tomarse en cuenta que el gráfico anterior no se a tomado en cuenta el punto correspondiente al tubo Nº7 (4; 0,137), debido a que este se escapa notoriamente de los rangos y por lo tanto afectaría directamente la línea de tendencia y por lo tanto el correcto desarrollo de la curva de calibrado.

Del gráfico anterior se obtiene la regresión lineal correspondientea:
y = 0,0506x + 0,0013
Donde: x: Concentración de α-Lactoalbumina
y: Absorbancia
Si se despeja x se obtiene la expresión:
x = y – 0,0013
0,0506

La absorbancia de la muestra obtenida a partir de Leche Descremada Next de Soprole corresponde a 0,188 nm, según la expresión anterior la concentración de la muestra corresponde a:

C = 0,188 – 0,0013 = 3,68 mg/mL...