Extraccion de proteinas

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Santiago Mellerio
Fecha de Entrega:

Extracción y caracterización de una Proteína:

OBJETIVO:

• Extracción de la caseína de una muestra de leche descremada.
• Reconocimiento de la naturaleza proteica.
• Identificación de algunos aminoácidos en la proteína (Fenilalanina, Tirosina).

MATERIALES: SUSTANCIAS:

Vaso de Bohemia Muestra de lechedescremada
Termómetro C2H4O2(Ácido acético) 2,0M
Vidrio de reloj C2H6O (Etanol)
Papel de filtro CuSO4 (Sulfato de Cobre II) 1%
Probeta 50 ML NaOH 10%
Tubo de ensayo HN03 (Ác. Nitrico)
Pinza Reactivo de Millon

TÉCNICA:

I) Extracción de la Caseína:

• Verter aproximadamente 20 mL de leche descremada en un vaso de Bohemia.
• Calentar hasta 40ºC,adicionando por goteo, ácido etanoico 2, agitar en forma continua y hasta q no se observe mas precipitación.
• Dejar decantar, y pasar el sólido obtenido a otro vaso de Bohemia.
• Disgregar el sólido con ayuda de una varilla.
• Lavar con aproximadamente 20 mL de etanol y dejar decantar.
• Desechar el líquido y secar el sólido entre hojas de papel de filtro.
• Pasar pequeñasfracciones del sólido a 3 tubos de ensayo.

II) Reacción de caracterización:

Reacción de Biuret
• Agregar sobre la Caseína 20 gotas de solución acuosa al 10% de hidróxido de sodio y 2 gotas de solución acuosa de sulfato de cobre II.
• Anotar observaciones.

Reacción Xantoproteica
• Agregar sobre otra muestra de Caseína 10 gotas de ácido nítrico concentrado.
• Anotarobservaciones.

Reacción de Millon
• Colocar 2 gotas de Reactivo de Millon y si no se observa cambio, calentar suavemente en un mechero.
• Anotar observaciones.
OBSERVACIONES:

Al realizar la primer reacción (Reacción de Biuret) con la Caseína observamos que la muestra adoptó un color violeta, con lo que podemos decir que la reacción dio positiva. Luego, a la segunda muestra de Caseínale agregamos ácido nítrico (Reacción Xantoproteica) a la cual se le noto un cambio de color a amarillo, aquí también podemos decir que la reacción dio positivo. Por último, a la tercer muestra de Caseína le realizamos la reacción de Millon, la cual consiste en incorporar Reactivo de Millon a la muestra, en este caso a la Caseína, y como observacion notamos que la muestra tomo un color rojo claroy como consecuencia dio positivo a la reacción de Millon.

FUNDAMENTO TEÓRICO:

Caseína: La Caseína (del latín caseus, “queso”) es una fosfoproteína (un tipo de proteína conjugada o hetereoproteína) presente en la leche y en algunos de sus derivados (productos fermentados como el yogur o el queso). En la leche, se encuentra en su fase soluble asociada al calcio (fosfato de calcio) en uncomplejo que se le ha denominado caseinógeno. La caseína representa cerca del 77 al 82 % de las proteínas presentes en la leche y el 2.7 % en la composición de la leche líquida.

Proteína: Las proteínas son macromoléculasformadas por cadenas lineales de aminoácidos. El nombre proteína proviene de la palabra griega  "prota", que significa "lo primero".
Las proteínas desempeñan un papel fundamental enlos seres vivos y son lasbiomoléculas más versátiles y más diversas. Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan:
• Estructural (colágeno y queratina)
• Reguladora (insulina y hormona del crecimiento),
• Transportadora (hemoglobina),
• Defensiva (anticuerpos),
• Enzimática (sacarasa y pepsina),
• Contráctil (actina y miosina).Aminoácidos: Los aminoácidos se obtienen al hidrolizar una proteína, lo que da lugar a estas muy sencillas moléculas.
Estos monómeros poseen, todos ellos, una función amina y una función ácido, de aquí el nombre aminoácidos.
El carbono más cercano al grupo carboxilo recibe el nombre de carbono α, y es precisamente en este carbono en el que se encuentra unido al grupo amino, de aquí su nombre de α...