Extracción de adn

Páginas: 8 (1980 palabras) Publicado: 19 de febrero de 2011
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
ACADEMIA DE BIOQUÍMICA
CENTRO DE CIENCIAS BÁSICAS
PRÁCTICA Nº 2
“EXTRACCIÓN DE ADN DE CÉLULAS EUCARIOTICAS”

ALUMNOS:
LUÉVANO RODRÍGUEZ DIANA LAURA

CARRERA: LIC. EN ANÁLISIS QUÍMICO BIOLÓGICOS.
6º SEMESTRE

PROFESOR: M.C. LUCÍA ISABEL CHÁVEZ ORTIZ
TÉCNICO: MC ROSALBA BEAS FERNÁNDEZ

FECHA DE ENTREGA: 21 DE FEBRERO DE 2011

PRÁCTICA Nº 2
“EXTRACCIÓN DEADN DE CELULAS EUCARIOTICAS”
OBJETIVO (S): Al final de la práctica el alumno aprenderá una de las técnicas más utilizadas para la extracción de ADN de diferentes muestras de tejido animal o vegetal.
INTRODUCCIÓN:
En la naturaleza, el DNA se localiza en el núcleo de las células eucarióticas en forma de desoxirribonucleoproteína. El aislamiento requiere su extracción de la célula y posteriorseparación de la proteína asociada. El complejo de nucleoproteína puede extraerse con cloruro sódico 1 M, y, al agitar la disolución viscosa con cloroformo que contenga un poco de alcohol octílico o amílico, la proteína forma un gel en la interfase cloroformo-agua mientras que la sal sódica del ácido nucleico permanece en la fase acuosa. Un método más apropiado para disociar el DNA de la proteínaconsiste en utilizar detergentes como el dodecil sulfato de sodio o el xileno sulfonato sódico, aunque, como método alternativo, también se emplea mucho el fenol. La información relativa al método con el fenol ha sido descrita por Kirby.
Los métodos empleados en el aislamiento del DNA varían según la naturaleza biológica del material implicado. Los procedimientos para DNA animal, vegetal ybacteriano han sido ampliamente descritos. Para microorganismos en general, uno de los más satisfactorios el de Marmur, el cual incluye rotura de las células, desnaturalización de restos celulares y separación de RNA por ribonucleasa seguida de precipitación selectiva de DNA con Isopropanol. La adición de agentes quelantes y dodecil sulfato de sodio evita tanto la contaminación por iones metálicosbivalentes como la degradación por desoxirribonucleasa, la cual requiere iones metálicos bivalentes para su acción hidrolítica. Se han descrito métodos para el aislamiento de DNA de mitocondrias y de cloroplastos.
El problema más grave a la hora de aislar DNA de fuentes naturales es evitar la degradación por nucleasas y rotura por cizalladura. Las hebras delgadas y largas que constituyen la moléculade DNA se rompen muy fácilmente incluso al agitar la solución. Sin embargo, El DNA de E. coli puede aislarse mediante lisis muy suave de las células en la capa superficial de una disolución de cloruro de cesio, separando por centrifugación en gradiente todo el DNA del genóforo “cromosoma” bacteriano como una molécula entera de aproximadamente 1 mm de largo, con 3x106 pares de basescorrespondientes a un peso de 2 x 10 9 dáltones.
Se ha obtenido DNA de alto peso molecular de cromatina de mamífero simplemente tratando con el enzima proteolítico de amplio espectro, proteínasa K. Las preparaciones homogéneas de DNA de especies monomoleculares son de muy difícil obtención. Las fuentes más apropiadas son los virus con DNA. Los manuales de Cantoni y Davies y Grossman y Moldave ofrecen ampliainformación relativa a métodos de laboratorio para el aislamiento y purificación de DNA de precedencias diversas (1).
Aunque existen diferentes metodologías para realizar la extracción de los ácidos nucleicos existen unos pasos esenciales. Primero, se necesita el material inicial. Este puede ser un cultivo bacteriano o de células eucariotas, que pueden ser separadas del medio de crecimiento(por ejemplo por centrifugación), o una muestra más compleja (tejido), el cual debe ser homogenizado para que las células puedan ser lisadas. En todos los casos se recomiendo tener el material lo más fresco posible guardado en crio-viales en un congelador a -80ºC o en nitrógeno líquido hasta su uso, para evitar la degradación por enzimas extracelulares.
El segundo requerimiento es que el ADN esté...
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