Fago Lambda

Virus bacterianos usados como vectores de clonamiento.
No solo los plásmidos sirven para clonamiento, los virus bacterianos tambien sirven.
¿Cómo se utilizan sus genes? ¿Cuál es la estrategia de colonamiento?
Los virus bacterianos infentan bacterias (bacteriofagos), los virus más estudiados son los que infectan a E. coli, denominados colifagos. El coliafago a estudiar es el fago lambda. Paraque este produzca infección a E. coli deben cumplirse ciertos requerimientos especiales. Cuando un virus infecta una bacteria, esta partícula no entra completamente, sino que solo inyecta el DNA (a diferencia de algunos virus eucariontes que entran completamente a la célula y luego se desnudan, liberando así el matyerial genético).
El fago λ (maduro) posee un DNA lineal de doble hebra de 50kpb(promedio), donde tiene todas las funciones para replicación del virus, la producción de proteínas virales, por lo tnato cuando infecta E.coli ella desaparece porque la célula se rompe por la infeccion, pues los virus poseen genes líticos. Entonces los virus son liberados al medio de cultivo. Ese se denomina ciclo lítico. Pero el fago λ también puede seguir un ciclo lisogénico( no existe lisis, elDNA viral se integra al DNA bacteriano, y se expresan solo algunos genes, pero no ocurre nada más, el virus queda latente), dependiendo de ciertos factores.
Los fagos pueden ser utilizados para tratar con infecciones bacterianas, pero se debe tener claro que fase ocurre en la infección, pues se debe asegurar la lisogenia para controlar la infección.
Si se toma una muestra fecal humana se ve que enella existe fago λ y E. coli. Es mucho mejor tratar enfermedades con fagos líticos que son específicos para un tipo de bacteria que con antibióticos, pues no hay riesgo de destruir a las otras células. Esto supone una aplicación biotecnológica.
E. coli es una bacteria gram (-), que posee una proteína en la membrana interna llamada lamb – B, que es la receptora del fago λ. Esta proteína es unaporina receptora de maltosa y maltodextrina, y para que se induzca la expreion de ese gen, la bacteria debe crecer en presencia de maltosa, asi se puede infectar con fago λ. Si la bacteria es mutante carente de lamb –B, entonces no será infectada por fago λ. Luego de este contacto (etapa de adsorción) el virus inyecta el DNA viral a través de la envoltura bacteriana al citoplasma bacteriano, endonde pasa de ser una hebra lineal a una circular.
El virus maduro posee un DNA de 50kpb lineal de doble hebra, el cual esta contenido en una cápside proteica(icosahedro regular). La regulación de la expresión génica en procariontes esta dada por la transcripción, es decir, el fago λ depende de la maquinaria transcripcional de la bacteria (RNA pol bacteriana). Posee una cola conformada por discosproteicos apilados (35 aproximadamente), corresponde a un cilindro hueco por donde se inyecta el DNA viral) y unas proyecciones proteicas llamadas espículas encargadas de la absorción a la superficie bacteriana ( un fago podría no tener espículas, lo que no es un impedimento para la infección).
Caminos: ciclo lítico y lisogénico. En fase lítica, por cada bacteria infectada por el fago λ seobtendran otras 100 particulas virales luego de la lisis.
El DNA del fago λ posee dos extremos de 12 nucleótidos, llamados cos r y cos l, que son complementarios entre sí, por esto se circulariza y la ligasa los une dentro del citoplasma bacteriano, formando una estructura parecida a la de un plásmido, quedando protegido ante la accion de las endonucleasas (ellas degradan DNA lineal)
Vía lítica: seexpresan todos los genes virales. Genes que se expresan primero se denominan genes inmediatamente tempranos, luego los demorados tempranos, finalmente los tardios, que codifican para las proteínas de la partícula viral. Hay transcripción secuencial de los genes durante la vía lítica.
Vía lisogénica: se expresan los genes inmediatamente tempranos y algunos de demorados tempranos. El DNA viral es...