Fisiología

TEMA1: MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS
Nos basamos en la idea de que la radiación porta energía, además la energía está relacionada con la longitud de onda.
La espectroscopia de absorción se basa en quelas moléculas pueden absorber fotones de determinada λ. El mecanismo de absorción consiste en pasar de un estado fundamental a un estado excitado (transiciones electrónicas) o pasar en el mismo estadofundamental de un estado vribracional a otro.
En química orgánica se suelen utilizar infrarrojos para determinar radicales de moléculas, en bioquímica, sin embargo, se utiliza UV y visible. Seutilizan citocromos y pigmentos vegetales que absorben luz visible. Se puede cuantificar su presencia según la absorción.
Si queremos determinar una molécula, la tratamos con un reactivo que la reconozcay produzca una reacción de color. De este modo, a mayor concentración de la molécula, mayor intensidad de color que puede cuantificarse por absorción (mayor señal de absorción, mayor [molécula].
A= k*c = ε*c*l
k: constante
c: concentración
l: paso de luz
ε: coeficiente de extinción molar
Mediante la espectroscopia podemos cuantificar proteínas. Los métodos que utilizan la luz visible conLowry o Bradford. En el método de Lowry la reacción coloreada se da despacio, pero es estable en el tiempo, de modo que podemos medir la abosrbancia más tarde que con el método Bradford. En el métodoBradford la reacción coloreada se da rápido, pero es poco estable en el tiempo, por lo que hay que medir rápido.
Si utilizamos UV para cuantificar proteínas usamos A280, mientras que para ácidosnucleicos usamos A260.
Fluorescencia: una molécula capta luz y se excita. Parte de la energía captada se disipa en forma de calor y el resto se mide como luz fluorescente.
Cualquier fluorocromo presentauna λ de absorción que es menor que la λ de emisión. Absorbe fotones de una determinada energía y emite fotones de menor energía (por tanto de mayor λ).
Aplicaciones de la fluorescencia: biología...