Fitoquimica

INFORME DE LABORATORIO 3: DETERMINACIÓN DE ACETOGENINAS EN ANNONACEAS, Annona muricata.

Luis Carlos Quimbayo 0701 5020 2002
Nelson Bocanegra 0701 5026 2002
Paola Pulido 0701 0036 2002
Gisela Vera 0701 5029 2002

Presentado a los profesores:
Jorge Enrique Hernández
José Luis Tenorio
Fitoquímica

ACETOGENINAS

En los 80s, se descubrió que las plantas contienen una clase de productosnaturales con una gran gama de actividades biológicas. Desde entonces, los estudios fitoquímicos y farmacológico se han intensificado para las especies de la familia Annonaceae. En 1982, Cole y Jolad fueron los primeros en aislar una de las acetogeninas de las raíces secas de Uvaria, la uvaricina, la cual muestra una potente actividad antileucémica; desde entonces se vienen haciendoinvestigaciones sobre el aislamiento y la actividad biológica de 350 acetogeninas diferentes, que se han encontrado en 37 especies de la familia Annonaceae. De igual manera, esto concuerda con las actividades biológicas que han descubierto las tribus indígenas, entre las cuales se destacan su poder pesticida, antiparasital y antimicrobial.

Las Anonáceas son una gran familia de árboles y arbustos, ampliamenteestudiada en los últimos años, debido, al descubrimiento de una nueva clase de componentes naturales llamados acetogeninas, las cuales forman un grupo de productos naturales bioactivos considerados como unos de los más potentes inhibidores del complejo I (NADH: ubiquinona oxidoreductasa) del sistema de transporte de electrones de las mitocondrias, y de la enzima NADH: oxidasa de la membranaplasmática, que caracterizan a las células cancerígenas.


OBJETIVOS

Determinar la presencia de acetogeninas en Annona muricata (Fam: Annonaceae)

Realizar el fraccionamiento guiado por cromatografía en capa delgada (CCD) del extracto etanólico obtenido del vegetal.

Interpretar el corrido de cada fracción y por ende; el de cada metabolito o grupo de metabolitos observados en la placa,mediante el cálculo de Rf.

MATERIALES Y EQUIPOS

Guía de laboratorio 3
Solventes para el fraccionamiento
Acido 3,5 dinitrobenzoico
Acido fosfomolibdico
Metanol
Cromatoplacas
Plancha de calentamiento
Embudo de separación
Embudo
Beaker
Capilares


METODOLOGIA

Para el desarrollo de esta practica, se siguió al pie de la letra el protocolo de la guía de laboratorio Nº 3 “Determinaciónde acetogeninas en Anonáceas” (Hernández 2005).

Sin embargo cabe mencionar que el extracto bruto con el que se trabajo fue obtenido mediante decocción de semillas trituradas de anona muricata de la siguiente manera:

- Se trituraron las semillas del ejemplar en un mortero de metal.
- Se pesan 50g del material triturado y se introduce en un frasco con tapa.
- Se calienta aprox.200ml etanol al 95% en una estufa plana hasta llevarlo a una temperatura de 55 ° C.
- El etanol caliente se adiciona en el recipiente que posee los 50g de semilla triturada hasta 1cm por encima de la muestra, se tapa y se agita durante 3min. El extracto etanólico obtenido es llevado a otro recipiente y la semilla triturada sobrante se deja enfriar durante 5min.
- Lo anterior se repite 5veces o hasta que el extracto obtenido vaya tomando una tonalidad incolora.
- Por último todo el extracto obtenido se lleva a baño maría para concentrarlo.


Métodos de extracción de acetogeninas (Rupprecht 1990)

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Las fracciones F001 (extracto total EtOH crudo); F003 (orgánica, soluble en cloroformo, CHCl3); F005 (soluble en MeOH) y F006 (soluble en Hexano) fueron puestas en laplaca en el siguiente orden:




[pic]
Figura 1. Posición de las fracciones del extracto en el cromatograma

Las dos fracciones restantes F002 (soluble en H2O) y la F004 (Interfase insoluble) no fueron utilizadas, debido a que no tienen los metabolitos de interés para este trabajo.

Detección de acetogeninas

Se hicieron dos placas para cromatografía, en las cuales se utilizó como...