Foafatasa

[pic]RESULTADOS

Protocolo y resultados

1. curva de calibración para la formación de p-nitrofenol:

• preparar 6 tubos con 0, 1, 2, 3, 4 y 5 ml de solución 60 μM de p-nitrofenol.
• Llevar cada tubo a un total de 6 ml agregando 0.1 M NaOH.
• En calorímetro leer absorbancia a 405 nm. Usa la muestra sin p-nitrofenol como blanco).

|Tubo |p-nitrofenol60ulM (ml) |Volumen NaOH 0.1 M (ml) |Concentración p-nitrofenol|Absorbancia a 405 nm |
| | | |(umol) | |
|1 |0 |6 |0 |0 |
|2 |1|5 |0.06 |0.178 |
|3 |2 |4 |0.12 |0.378 |
|4 |3 |3 |0.18 |0.544 |
|5|4 |2 |0.24 |0.740 |
|6 |5 |1 |0.30 |0.900 |

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Y = 3.024X ( A = 3.024 (umoles Producto)

2. búsqueda del intervalo de tiempo en el que se satura la enzima:

•preparar distintos tubos con solución de 2ml de buffer citrato- etilendiamina (pH 5) y 2 ml de p-nitrofenolato 2.5 Mm.
• Poner el tubo a 37ºC en baño de agua por unos minutos, al agregar ya la enzima diluída (1 ml).
• Inmediatamente transferir una alícuota de 0.5 ml de la mezcla a un tubo con 5.5 ml de NaOH 0.1M (control 0).
• Medir Absorbancia a 405 nm.

|Tubo|Tiempo (minutos) |p-nitrofenol (umol) |Absorbacia a 405 nm* |
|1 |0 |0.011 |0.033 |
|2 |3 |0.084 |0.251 |
|3|4 |0.117 |0.351 |
|4 |5 |0.125 |0.374 |
|5 |6 |0.170 |0.510 ||6 |7 |0.187 |0.560 |
|7 |8 |0.192 |0.577 |
|8 |9 |0.191 |0.572|
|9 |11 |0.230 |0.689 |
|10 |12 |0.223 |0.668 |
|11 |13 |0.214 |0.642|
|12 |14 |0.219 |0.657 |
|13 |15 |0.258 |0.774 |

*la absorbancia indicada ya se le restó la A a tiempo

0[pic]

3. determinación de parámetros...