Fosfatasa acida

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ANLISIS ENZIMATICO: “FOSFATASA ÁCIDA “

Introducción

Las enzimas son las proteínas de mayor especialización y poseen un elevado poder catalítico, superior al de los catalizadores inorgánicos. Funcionan en soluciones acuosas en condiciones suaves de temperatura y pH. Con excepción de un pequeño número grupo de moléculas de RNA catalítico, todas las enzimas son proteínas y suactividad catalítica depende de la integridad de su conformación proteica.
Las enzimas se clasifican según las reacciones que catalizan distribuyéndose en seis clases principalmente, cada una de ellas con diferentes subclases, según la reacción catalizada, encontrándose las oxidorreductasas, transferasas, hidrolasas, liasas, isomerasas y ligasas. La principal función de las enzimas es aumentar lavelocidad de la reacción; esto lo consiguen disminuyendo la energía de activación, pero no modifican los equilibrios de la reacción. Los incrementos selectivos de la velocidad de reacción se explican por la reordenación de los enlaces covalentes durante la reacción, estas interacciones enzima-sustrato disminuyen la energía de activación, acelerando por ende la velocidad de la reacción. Por otro ladola energía que proporciona un descenso de la energía de activación proviene de las interacciones débiles entre el sustrato y la enzima; al establecerse las interacciones débiles en el complejo enzima sustrato, en el estado de transición, se liberan pequeñas cantidades de energía, la cual es utilizada para disminuir la energía de activación; esta energía es llamada energía de fijación, y además deaportar la energía para el proceso catalítico, es la que le confiere especificidad a cada enzima por su sustrato.
El conocimiento de la cinética de las reacciones enzimáticas ayuda a comprender los fenómenos biológicos y a precisar las condiciones adecuadas de actividad enzimática para definir sus unidades y establecer comparaciones. El mecanismo de una reacción enzimática monomolecular serepresenta:

Enzima + Sustrato ---- complejo enzima-sustrato --- Enzima + Producto
(E) (S) (ES) (E) (P)

En este práctico observaremos la cinética de la enzima fosfatasa acida, la cual es una hidrolasa que cataliza la eliminación de un grupo fosfato de un sustrato, hidrolizando el enlace ésterfosfórico entre el grupo fosfato y un radical orgánico a PH acido; dando como resultado Pi; para ello se utiliza como sustrato artificial al p-nitrofenolfosfato y el producto de la reacción es estabilizado utilizando hidróxido de sodio, dando como producto final al p-nitrofenolato, el cual tiene la propiedad de absorber luz a una longitud de 405nm.

Por la misma explicación dada anteriormente se investigan las enzimas, ya que son una herramienta muy necesaria en los organismos, por lo ejemplo se investigan la participación en la base molecular de la respuesta inmune y en enfermedades como la obesidad la diabetes y el Alzheimer. En parásitos protozoarios como cruzi y Leishmania, varias quinasas y fosfatasas han sido identificados,muchos de ellos han sido clonados, pero en varios casos, su función biológica sigue siendo indeterminada. En esta revisión, el estado de la técnica se resume y el papel de fosfatasas y quinasas en los fenómenos biológicos, como la remodelación, la invasión y la capacidad patógena de los parásitos protozoarios se describe. La posibilidad real de utilizar estos componentes de las vías de transducción deseñal como objetivo para la intervención de quimioterapia también se discute (1).

Objetivos

Se determinara la actividad enzimática de la fosfatasa ácida, es decir la formación de producto en el tiempo.

Obtener un intervalo de tiempo en que la actividad de la fosfatasa ácida sea el mayor, para luego poder trabajar en este intervalo.

Realizar las mediciones de actividad dependiendo de...