Fosfatasa acida

EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE TRIPSINA
I. INTRODUCCION
Al analizar como transcurre la reacción catalizada por una enzima con respecto al tiempo observamos que la velocidad de reacción disminuye. Mientras el tiempo aumenta la velocidad disminuye por factores tales como que el producto puede inhibir la reacción, que el grado de saturación disminuyepor que el sustrato se está agotando, y/o que la enzima puede inactivarse por que el pH o temperatura del medio que pueden estar cambiando. Por esa razón utilizar la velocidad inicial (Vo). Medida velocidad inicial significa medir la reacción de un período corto de tiempo de manera que se pueda asumir que los factores que pueden alterar la velocidad de reacción no cambian. En estas condiciones sepueden determinar el efecto que produce sobre la velocidad inicial la variación de un solo factor, manteniendo al resto constante.
Si se evaluá el efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad inicial, se observa qué medida que se incrementa la concentración de sustrato la velocidad aumenta hasta un Valor máximo. En ese momento se dice que la enzima está saturada con el sustrato. Setransformó una cantidad constante de sustrato por unidad de tiempo, y que es la máxima posible. Aun cuando se incrementa la concentración de sustrato, la velocidad inicial permanecer constante, se habrá alcanzado entonces la velocidad máxima (Vmax). Cuando la concentración de sustrato es pequeña, la velocidad inicial está en función a la cantidad de sustrato.
Al evaluar el efecto que laconcentración de sustrato se observa un comportamiento hiperbólico, que puede ser descrito mediante la ecuación de Michaellis-Menten:


Donde:
Vo, representa la velocidad incial que alcanza la enzima para la concentración de sustrato representada por .
Vmax, representa la velocidad máxima de reacción alcanzada por una enzima en particular, en términos de velocidad inicial.
Km, representa laconcentración de sustrato a la cual la enzima trabaja a la mitad de la velocidad máxima. El Km es un valor constante para la enzima.
Sin embargo en condiciones prácticas la representación de las inversas de las concentraciones de sustrato y las inversas de los valores de velocidad nos permite hacer determinaciones exactas de los valores de Vmax y Km para una enzima (ecuación de Lineweaver-Burk).

II. MARCOTEÓRICO
El conjunto de las enzimas proteolíticas está constituido de dos grupos: las endopeptidasas, que cortan enlaces peptídicos en el interior de las cadenas proteícas y las exopeptidasas, quecortan los enlaces peptidicos aminoterminales, carboxiterminales y los dipeptidos. (Cruz, et al 1996).
La tripsina, endoproteasa de la familia de las serin-proteasas, se caracteriza por un mecanismocatalítico común, implicando tres residuos aminoacidicos (histidina, ácidoaspártico y serina) hidrolizando el enlace peptídico del lado carboxilico de la arginina o de la lisina. (Wormhoudt, et al 1999). Para evaluar la velocidad de tripsina, se utiliza el hidrocloruro de N-alfa-benzoil-DL-arginina-p-nitroanilida (BApNA), un sustrato sintético (Gamboa, 2001).
Este sustrato sintético, poseecaracterísticas proteicas y posee una especificidad de reconocimiento por parte de la Tripsina muy elevada, lo que permite un correcto análisis de las propiedades cinéticas de está enzima. El mecanismo de acción de BApNA es su analogía con el sustrato verdadero a nivel de las estructuras peptidicas, su extremo amino es bloqueado por el grupo radical Benzoil y en su extremo carboxilo se une a un grupocromógeno, que en la práctica es la p - nitroanilida la cual es hidrolizada a nivel de su enlace en el BApNA debido a la acción de la tripsina, la p - nitroanilida será llevada a medición en el espectofotométro a una longitud de onda de 410nm (Battaner, 2000)
Debe trabajarse con soluciones amortiguadoras que contengan CaCl2, lo que promueve una actividad y estabilidad óptima de la enzima, debido...