fotometria

PRINCIPIOS Y TECNICAS DE LA FOTOMETRIA

Introducción
Muchos de los experimentos bioquímicos incluyen la cuantificación de un compuesto o un grupo de compuesto que
forman parte de una mezcla en solución. Quizás la técnica mas usada para determinar la concentración de dichos
compuestos es la espectrofotometría.
La espectrofotometría (medición de la luz) es un método instrumental analítico quenos permite cuantificar y
caracterizar un compuesto en solución. Básicamente se está haciendo uso de las propiedades de los átomos y moléculas para
absorber o emitir la energía en una de las muchas áreas del espectro electromagnético total, específicamente en aquella parte
denominada LUZ la que consta de: Luz Ultravioleta (UV); Luz Visible y Luz Infrarroja (IR)
Las radiaciones que componen elespectro de luz visible, contienen la energía capaz de excitar a la retina y producir
el fenómeno de la visión (en colores en humano). Al referirnos al espectro electromagnético debemos pensar en términos de
unidades de energía, porque realmente de eso se trata. Se puede pensar que la energía se propaga en el espacio en forma de
onda, como la onda que se produce al dejar caer una piedra en unestanque de agua quieta, se forman concéntricamente
varias crestas con valles entre si. Las ondas de energía electromagnética se constituyen así, de modo que cuando más
próximas estén las crestas, mayor será la energía. Una de las medida que caracteriza la energía electromagnética es la
longitud de onda (), o sea la distancia que existe entre una y otra cresta de la onda (Fig. 1). Existe unarelación
inversamente proporcional entre la longitud de onda y su contenido de energía. Los valores de longitudes de onda varían
desde 1 amstrong o bien 0,1 nanómetro en los Rayos Gamma a más de 25 centímetros en las Ondas de Radio.
Convencionalmente se usa el nm (nanómetro) como unidad de medida, donde 1 nm = 10-9 m.

Figura 1. Movimiento ondulatorio de las radiaciones electromagnéticas.La Luz en sí es una pequeña parte del espectro de radiaciones electromagnéticas (Figura 2), y específicamente las técnicas
fotométricas utilizan aquellas longitudes de onda del espectro de luz ultravioleta y luz visible.

Figura 2. Rango de longitudes de onda del espectro de radiaciones electromagnéticas, se destaca la región de luz
visible en la que se indica además los valores energéticos delos rangos más importantes.
Las moléculas que componen la materia interactúan con la radiación electromagnética (energía radiante) a través
de una variedad de fenómenos, por ejemplo: reflexión, refracción, absorción, ionización, interferencia, difracción y
polarización.
Los métodos espectrofotométricos de análisis se basan en el fenómeno de absorción. Es decir la cantidad de
energía radianteque es absorbida en forma característica por cada compuesto (molécula) en particular.
En la figura 3 se representa la absorción de luz por parte de un compuesto coloreado en solución. El compuesto
sólo absorbe aquellas longitudes de onda del espectro visible que contienen los valores energéticos específicos requeridos
para mantener la estructura molecular del compuesto. Las longitudes de ondaque no son absorbidas serán transmitidas,
reflejadas, difractadas, etc., estas llegan al ojo humano y son traducidas en un color por el cerebro. Por ejemplo: si la
solución es de color azul absorberá en diferente magnitud todas aquellas longitudes de onda, excepto las correspondientes al
color azul cuyo contenido de energía es a lo menos reflejado ó transmitido y luego traducido en el colorazul una vez que
alcancen la retina del ojo humano y posteriormente la señal energética llegue al cerebro. La intensidad del color azul
dependerá directamente de la concentración del pigmento en solución.

Figura 3. Representación esquemática del fenómeno de la visión del rango de luz visible.

Aquellos compuestos incoloros que no absorben en el rango de luz visible, lo hacen en las otras...