fundamentos analisis cromatografico

INTRODUCCIÓ
INTRODUCCIÓN A LA HPLC
FUNDAMENTOS DEL ANALISIS
CROMATOGRAFICO.
Cromatografía Líquida de
Alta Resolución

Dr. JOSÉ ANTONIO FERNÁNDEZ LÓPEZ
Depto. Ingeniería Química
Grupo de Investigación QUIMYTEC
UPCT

INTRODUCCIÓ
INTRODUCCIÓN A LA HPLC
Cromatografía = escribir en colores
Elementos que participan en una
cromatografía
1. Fase estacionaria
2. Fase móvil
3. Muestra

¿Cómointeraccionan?
En general, una cromatografía se realiza
permitiendo que la mezcla de moléculas que se
desea separar (muestra) interaccione con un
medio o matriz de soporte que se denomina fase
estacionaria. Un segundo medio (la fase móvil)
que es inmiscible con la fase estacionaria se hace
fluir a través de ésta para "lavar" (eluir) a las
moléculas en la muestra.
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INTRODUCCIÓ
INTRODUCCIÓN A LA HPLCInicialmente se refería a:
ƒ High Pressure Liquid Chromatography
En la actualidad hace referencia a:
ƒ High Performance Liquid Chromatography

La alta presión permite usar relleno de tamaño de partícula reducido
para lograr la separación de componentes a flujos razonables.

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INTRODUCCIÓN A LA HPLC
HPLC = high performance liquid chromatography

fase móvil
(Líquido)

cromatografía líquida dealta resolución

Otras acepciones equivalentes:
high pressure liquid chromatography
high patient liquid chromatography
high priced liquid chromatography

bombas que permiten presiones de hasta 6000 psi (414
atm) hacen pasar la fase móvil por el interior de
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columnas de acero (2-5 mm x 3-25 cm) que contienen
la fase estacionaria con flujos de 0,1 – 10 ml/min.

INTRODUCCIÓ
INTRODUCCIÓN A LA HPLC
ƒLas muestras no necesitan ser vaporizadas para

su análisis. Cualquier sustancia puede
potencialmente analizada por esta técnica.

ser

ƒ El desarrollo instrumental es posterior al de la CG

debido a dificultades para lograr un flujo estable
en el eluyente.

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INTRODUCCIÓN A LA HPLC
ƒ

Una muestra en estado líquido es arrastrada por una
corriente líquida llamada eluyente.

ƒ

Comofase estacionaria actúa un sólido finamente
dividido (diámetro de partícula 3, 5, 10 μm), o una
película líquida a él adherida.

ƒ

Dependiendo de la retención de los componentes de la
muestra por la fase estacionaria y de su solubilidad en
el eluyente se provocará su migración diferencial.

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INTRODUCCIÓN A LA HPLC
Características:

Parámetros:

ƒ Selectividad

ƒ Naturaleza de lafase estacionaria

ƒ Reproducibilidad

ƒ Tamaño de partícula

ƒ Sensibilidad

ƒ Eluyente (composición y flujo)

ƒ Rapidez

ƒ Detector

Fase Directa:
fase estacionaria polar
fase móvil de baja polaridad

Fase Reversa:
fase estacionaria de polaridad baja
fase móvil de polaridad alta

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INTRODUCCIÓN A LA HPLC

ƒ Principales

mecanismos
cromatografía líquida:

de

interacción

en

–Adsorción superficial
– Partición
– Intercambio iónico
– Exclusión molecular

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INTRODUCCIÓN A LA HPLC
CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN

La fase estacionaria es sólida. La separación se logra
por las diferencias en solubilidad (en fase móvil) y de
retención por adsorción (en fase estacionaria) de la
mezcla de solutos.

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INTRODUCCIÓN A LA HPLC
CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN
ƒ Sílica(90%) y alúmina (10%) son las fases estacionarias

más comunes.
ƒ Tanto las moléculas de solutos como de disolvente son

atraídas hacia los lugares activos polares de la fase
estacionaria.
ƒ Unos solutos serán más atraídos que otros por la fase

estacionaria y así se logrará su migración diferencial.
ƒ Se usan mezclas de disolventes para conseguir el poder

de elución y la selectividad adecuadas.Normalmente un
disolvente apolar (n-hexano) unido a otro más activo
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(acetona, cloruro de metilo, etc.).

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INTRODUCCIÓN A LA HPLC
CROMATOGRAFÍA DE PARTICIÓN

La separación se basa en el reparto o distribución de
los solutos entre una fase móvil líquida y otra
estacionaria inmiscible, soportada sobre un sólido
inerte. La discriminación se produce por diferencias de
solubilidad.

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