genetica

Un sistema de selección de Arabidopsis thaliana transgénica utilizando tiocianato de potasio como el agente selectivo y AtHOL1 como la
marcador selectivo
Keiko Midorikawa †, Yukari Nagatoshi †, Tatsuo Nakamura *
Escuela de Graduados de Ciencias del Ambiente y de la Información de la Universidad Nacional de Yokohama, Yokohama, Kanagawa
240-8501, Japón
* E-mail: t-nakamu@ynu.ac.jp Tel & Fax:81-45-339-4416
Recibido el 6 de enero del 2009; aceptado 12 de febrero 2009 (editado por T. Mizoguchi)
Resumen La preocupación por el uso de genes de resistencia bacteriana a los antibióticos como marcadores de selección se considera como uno de los los factores de resistencia pública hacia los cultivos modificados genéticamente. Hemos demostrado previamente que el AtHOL1 Arabidopsis proteínatenía una alta actividad metiltransferasa S-adenosil-L-metionina-dependiente hacia el ion tiocianato (NCS?), el cual es tóxico para las plantas más allá de ciertas concentraciones. Contrariamente a nuestras expectativas con respecto a la facilidad de uso de AtHOL1 como marcador de selección, nuestras proyecciones de prueba iniciales para AtHOL1 con sobreexpresión Arabidopsis en medio agar MS quecontiene varias concentraciones de tiocianato de potasio en condiciones normales de crecimiento habían sido infructuosos. Con el fin de explorar la posibilidad de utilizar AtHOL1 en la transformación de Arabidopsis, las condiciones de detección para AtHOL1-sobreexpresan Arabidopsis fueron examinados más a fondo. Se encontró que las plantas de semillero transgénicas podrían ser examinados cuando lassemillas fueron germinado y crecido en condiciones de oscuridad-7 días seguido de un ciclo de oscuridad luz/12 12-h durante 3-7 días en un medio que contiene tiocianato de potasio 3,0-5,0 mM. Los análisis de las inserciones de transgenes en los genomas y AtHOL1 También se realizaron acumulación de ARNm en las plantas de semillero apantallados. Ni las plantas escaparon ni crecimiento alterado fueobservado con los plantones seleccionados en las condiciones reportadas aquí. Palabras clave: Arabidopsis thaliana, AtHOL1, tiocianato de potasio, S-adenosil-L-metionina-dependiente actividad metiltransferasa, marcador seleccionable.
Los genes marcadores seleccionables de origen bacteriano, tales como la gen de la neomicina fosfotransferasa (NPTII) (Bevan et al. 1983) que se desarrolla resistenciaa la kanamicina en transgénico plantas, han sido ampliamente explotados para la ingeniería de planta. Sin embargo, ya que la mayoría de los genes resistentes a los antibióticos utilizado actualmente en transgénico disponibles comercialmente las plantas son de origen bacteriano, ha habido preocupaciones acerca de la transferencia horizontal de genes de las plantas transgénicas respaldar a lasbacterias. Las estrategias que permiten a las plantas transgénicas . poseer ningún gen marcador (Ebinuma et al 1997; Endo et al. 2002; Corneille et al. 2001; Cotsaftis et al. 2002; Dale y Ow 1991; Gleave et al. 1999; Goldsbrough et al. 1993; Komari et al. 1996; McKnight et al. 1987), genes marcadores de origen vegetal (Andersson et al 2003.; Ayalew y Stewart Jr 2005, Koizumi 2003; Okuzaki et al. 2007),o genes marcadores de resistencia a los antibióticos sin . (Daniel et al 2001; Erikson et al 2004;. Goddijin et al. 1993; Gough et al. 2001; Herrera-Estrella et al. 1983; Joersbo et al. 2003; Kunze et al. 2001; Perl et al. 1993; Rosellini et al. 2007; Semanas et al. 2000) podría eliminar tales reservas sobre las plantas transgénicas En nuestros estudios bioquímicos anteriores, tenemos demostradola S-adenosil-L-metionina (SAM) - actividad metiltransferasa dependiente de Arabidopsis AtHOL1 proteínas (Nagatoshi y Nakamura 2007), que es un homólogo de cloruro de metil transferasa (MCT) desde Batis maritima (Wuosmaa y Hager 1990; Ni y Hager 1998) y tiol metiltransferasa (TMT) desde Brassica oleracea (Attieh et al 2000;.. Attieh et al 2002). Las hipótesis sobre las funciones fisiológicas de...