Genetica

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Universidad Nacional Autónoma de México
Facultad de Química
Curso Genética y Biología Molecular (1630) Licenciatura Químico Farmacéutico Biológico
Dra. Herminia Loza Tavera Profesora Titular de Carrera Departamento de Bioquímica Lab 105, Edif E 5622-5280 hlozat@unam.mx

IX. PRINCIPIOS DE INGENIERÍA GENÉTICA
• Objetivo general
– El alumno conocerá los principios de la tecnología del DNArecombinante y su potencial para generar organismos genéticamente modificados.

Objetivos particulares
El alumno...
1. Aislamiento, análisis y manipulación de ácidos nucleicos 1.1. Examinará los principios y las bases de algunas técnicas utilizadas en biotecnología (PCR, construcción y escrutinio de bibliotecas, Northern y Southern-blot, microarreglos). 1.2. Distinguirá las diferencias entrebiblioteca genómica y de cDNA. 1.3. Comprenderá el principio de la técnica de la amplificación de ácidos nucleicos por PCR. 1.4. Conocerá los métodos de análisis para evaluar la expresión genética a nivel de RNA y proteínas. 2.1. Conocerá las características, funcionamiento e importancia de las enzimas de restricción. 2.2. Conocerá las características principales de los plásmidos como vectores declonación. 2.3. Conocerá la existencia de vectores de clonación diferentes a los plásmidos (fagos, cósmidos, BACS y YACS). 2.4. Describirá las técnicas y pasos para la clonación y expresión de moléculas recombinantes de DNA en organismos heterólogos. 3.1. Conocerá los métodos utilizados en la expresión de proteínas recombinantes en organismos heterólogos. 3.2. Conocerá la aplicación de losorganismos transgénicos en la agricultura, farmacia y medicina. 3.3. Conocerá la aplicación de producción fármacos y vacunas en animales y plantas transgénicos. 4.1. Conocerá las estrategias generales de clonación de células de mamíferos. 4.2. Conocerá las características generales de las células troncales y las aplicaciones potenciales de éstas en la terapia.

Conoci- Compren- Aplicamiento sión ción
XX

X X X X X

2. Generación de moléculas de DNA recombinante

3. Ingeniería Genética

X X

X
X X

4. Clonación y células troncales.

Ingeniería Genética II

Expresión de proteínas recombinantes
Vectores de expresión

Características adicionales:
- Promotor regulable - Terminador de la transcripción - Sitio de reconocimiento por el ribosoma

IPTG

inductor

Análisisde la expresión de proteínas recombinantes empleando PAGE

Producción de proteínas recombinantes en bacterias

Escalamiento y purificación de la proteína

La tecnología de DNA recombinante genera herramientas para estudiar los genes y sus productos

Insertar en vector de expresión

Transformar E. coli u otro hospedero

Deducir secuencia de aminoácidos

Preparar péptidossintéticos

Preparar anticuerpos específicos para una proteína

Secuencia de aminoácidos

Sintetizar sonda específica

Escrutinio de una biblioteca de DNA por Southern blot

Anticuerpo específico

Escrutinio de una biblioteca de expresión por Western blot

Western Blot (detección de proteínas específicas empleando anticuerpos)

La detección de proteínas sirve para conocer:
1. 2. 3. 4. 5.Niveles de expresión Isoformas Modificaciones postraduccionales Tiempo de vida media y degradación Localización subcelular

El uso de anticuerpos permite la localización de proteínas en las estructuras celulares

Uso de las técnicas de DNA recombinante en diferentes ámbitos de utilidad al hombre

Aplicaciones las técnicas de DNA recombinante en Biotecnología Vegetal
• Plantastransgénicas que expresan proteínas que le confieren alguna propiedad agronómica importante: – Resistencia a plagas de insectos – Resistencia a herbicidas – Resistencia a virus
• Detección de microorganismos patógenos en plantas por métodos moleculares. – Virus, bacterias, micoplasmas

El mejoramiento tradicional de plantas implica hacer una cruza entre genotipos distintos para incorporar un...
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