Graficos Del Embarazo Precoz

FUNDAMENTO:
1º.- La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas: En
primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana
plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A
continuación debe romperse también la membrana nuclear para
dejar libre el ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas
emulsionan los lípidos de las membranas celulares y las rompen.
2º.- Lasal evita la unión de las proteínas al ADN.
3º.- Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El
ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se
desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua.
Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de
otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución
acuosa.
El procesoefectuado en el laboratorio para la purificación del DNA a partir de leucocitos humanos, se basó en la aplicación del método "Wizard Genomic Purification Kit" como ya lo habíamos mencionado anteriormente.
1. Partiendo de una muestra de 300 ml de sangre humana (sacada con una micropipeta graduada previamente y limpiada luego con fluhidróxido de sodio para aumentar el ph y destruir la contaminaciónbiológica que probablemente adquirió) previamente tratada con heparina que es un anticoagulante, se procedió a mezclar con el tampón de cloruro de magnesio (Cell Lysis Solution y el cual tenía una cantidad de 900 ml) que entra en las células y genera una desestabilización osmótica, haciendo que las células se hinchen y se estallen sus membranas celulares. Todo esto se logra en un tiempo de incubaciónde 10 minutos a 37ºc para favorecer la reacción. Luego procedemos a centrifugar para ayudar con el rompimiento de la membrana y a la vez para sedimentar los núcleos de leucocitos, quedando un sobrenadante compuesto por restos de membrana, organelas celulares, protoplasma y restos de hemoglobina que le da un color rojo con tendencia a oscuro.
2. Se procedió a la extracción del sobrenadante conla micropipeta varias veces para sacar la mayor cantidad posible, evitando succionar los núcleos de los leucocitos. Esta cantidad de núcleos sedimentados es llevada al vórtex por 15 segundos para resuspenderlos y facilitar el mismo proceso.
3. Se agregaron 300ml de Nuclei Lysis Solution la cual es básica (NONIDET P4O) que actúa selectivamente en la membrana nuclear con el objetivo de romperla yliberar los ácidos nucleicos ejerciendo así su función detergente. Luego de mezclar la solución con la pipeta, se empezó a observar de consistencia muy viscosa.
4. Adicionamos 1,5 ml de RNase solution y mezclamos invirtiendo el tubo 25 veces para luego proceder a incubar la muestra a 37ºc y por un tiempo de 15 minutos. Este procedimiento se hace con el fin de desintegrar el RNA, quedando así elDNA y varios tipos de proteínas.
5. Pasados los 15 minutos de incubación agregamos 100ml de Protein precipitation solution (proteinasa K) y colocamos en el vórtex por 20 segundos. La solución de precipitación de proteína que es básicamente cloruro de sodio, solvata las proteínas e inicia su precipitación. Centrifugamos por 3 minutos para agilizar este proceso de precipitación.
6. Terminado elproceso de centrifugación, se pudo observar una pequeña porción sedimentada de color rojo oscuro que contiene las proteínas y con ellas la presencia de hemoglobina con su color rojo característico. El sobrenadante es de color transparente y contiene el DNA, aunque aún no visible.
7. Retiramos el sobrenadante y lo mezclamos con 300ml de isopropanol. Luego de haber invertido esta varias veces,buscando la buena interacción de los componentes, pudimos observar el DNA como unas pequeñas fibras de algodón color blanco y esto se logró gracias a que el isopropanol deshidrata el DNA e inicia su sedimentación.
8. Centrifugamos para sedimentar el DNA y sacar la mayor parte posible de isopropanol y le agregamos al DNA sedimentado 300ml de etanol al 70% para rehidratarlo y luego centrifugar por 1...