HCDMI

Trabajo Practico de laboratorio Nº 2 -Fotometría


Tema: Determinación cuantitativa de proteínas (Método calorimétrico)


Aspectos teóricos

La fotometría o “medida de la luz” es un métodoóptico de análisis dentro del cual se encuentran la calorimetría y la espectrofotometría, las cuales miden la cantidad de luz absorbida por sustancias coloreadas o incoloras respectivamente.

La luzpuede ser considerada como una perturbación electromagnética de naturaleza ondulatoria que se propaga en el vacío en forma recta.

Longitud de onda: es la distancia entre dos picos sucesivos de unaonda.
La luz que percibe el ojo humano es la luz visible y comprende desde 400 a 700 nm.
La que contiene longitudes de onda superiores a 700 nm no es el visible para el ojo y se llama infrarroja.Por debajo de 400nm tenemos la radiación ultravioleta (100-400nm).



Las medidas de absorción de la luz se basan en dos leyes: la Ley de Lambert y la Ley de Beer.

Ley de lambert: cuando unrayo de luz monocromática pasa a través de un medio absorbente, su intensidad disminuye, exponencialmente a medida que la longitud del medio absorbente aumenta.

I = I0 . 10-K . Llog ( I0 / I) = K . L

Donde:

I: Intensidada de luz transmitida
I0: Intensidad de luz transparente
K: Coheficiente de extincion
L: Espesor de capa
K serefiere a las sustancias en general, sin estar en disolución.
Ley de Beer: Cuando un rayo de luz monocromática pasa a través de un medio absorbente, su intensidad disminuye exponencialmente a medida queaumenta la concentración de la sustancia absorbente en el medio.


I = I0 . 10-K´ . L log ( I0 / I) = K´ . C

Donde:

C: concentración de lasustancia absorbente.



Estas dos leyes se combinan en la ley de Lambert-Beer:

I = I0 . 10 – ε . C . L log ( I0 /...