Hematopoyesis

UNIVERSITAS SCIENTIARUM Revista de la Facultad de Ciencias PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

Enero-junio de 2004
Vol. 9, 57-67

G E N E R A C I Ó N in vitro DE CÉLULAS DENDRÍTICAS HUMANAS DE ORIGEN MIELOIDE
Adriana Cuellar Avila1*, Catherine Cifuentes Rojas1, John Mario González Escobar1-2
1. Grupo de Inmunobiología y Biología Celular, Departamento de Microbiología, Facultad de Ciencias,Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá. 2. Department of Neurology, Keck Medical School, University of Southern California, Los Angeles, CA, USA acuellar@javeriana.edu.co RESUMEN Las células dendríticas son importantes reguladores de la respuesta inmune celular. Estas células son consideradas como presentadoras profesionales de antígenos, con potente capacidad de estimular linfocitos T vírgenes.El objetivo de este trabajo fue establecer un modelo de cultivo in vitro para la obtención de células dendríticas mieloides humanas a partir de monocitos CD14+ de sangre periférica. Se utilizaron citoquinas como IL-4 y factor estimulador de colonias granulo-monocíticas (GM-CSF) para la obtención de células inmaduras y la posterior incubación con PGE2 y TNFa para la obtención de células maduras.Utilizando este modelo se obtuvieron células dendríticas inmaduras al día 5 y células dendríticas maduras al día 7, lo cual fue confirmado por los cambios en la morfología y la expresión de marcadores de superficie como CD14, CD86, HLA-DR y CD83. El estudio de la cinética de maduración de células dendríticas, es de utilidad en protocolos de inmunoterapia para diferentes tipos de cáncer y en ladefinición de mecanismos inmunes involucrados en diferentes inmunopatologías causadas por antígenos provenientes de alergenos o de microorganismos. Palabras claves:citoquinas, células dendríticas, monocitos, GM-CSF, IL-4. ABSTRACT Dendritic cell activity is an important step to elicit cellular immunity. These cells are the most potent antigen presenting cells and the main activating factor for naive Tcells. There are several phenotypes of dendritic cells originated from different cell precursors. The aim of this study was to assess a model to obtain human myeloid dendritic cells from peripheral blood CD14+ monocytes. Cells were cultured in the presence of granulocyte-monocyte colonies stimulating factor (GM-CSF) and IL-4 to obtain immature dendritic cells, wich were further cultured with PGE2plus TNFa to induce their maturation. We obtained immature dendritic cells at day 5 and mature dendritic cells at day 7, according to microscopic cellular phenotype and positivity of membrane markers for CD14, CD86, HLA-DR and CD83, Key words: cytokines, dendritic cells, monocytes, GM-CSF, IL-4.

INTRODUCCION Una de las células con capacidad para estimular linfocitos que no han tenido contactocon antígenos son las células dendríticas, las cuales se consideran como potentes células presentadoras de antígeno profesionales. Esta función es posible gracias a su

potencial para capturar antígenos en los tejidos periféricos en su estado de inmadurez, procesarlos mientras viajan al órgano linfoide secundario, en donde se completa su maduración y presentarlos en contexto
* En memoria delDoctor Julio Alberto Latorre Lázaro

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de moléculas del Complejo Mayor de Histocompatibilidad en las áreas de linfocitos T del nódulo linfoide (Revy, 2001; Lanzzavechia, 2001; Romani, 1989; Russo, 200; Teunissen, 1990). En este proceso de activación de linfocitos T, las células dendríticas expresan moléculas de superficie y liberan moléculas quepolarizan la respuesta de los linfocitos activados para secretar citoquinas de tipo Th1, como en el caso de las células que secretan INFg y TNFβ, o citoquinas de tipo Th2 como IL-4, IL-5, IL-9 o IL-13 (Jankovic, 2001; Lanzzavechia, 2000; Romagnani, 2000). El ejemplo claro de una citoquina secretada por la célula dendrítica y que participa en la regulación de la respuesta linfoide, es la IL-12. Cuando la...