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PRACTICA DEL LABORATORIO DE BIOLOGIA

Tema: AZUCARES REDUCTORES
Experiencia: Determinación cuantitativa de azúcares reductores y totales (método de Lane y Eynon).
Objetivo:

A. Reactivos:
1. Solución de Fehling A (34,639 g de CuSO4◦5H2O en 500 ml de agua)
2. Solución de Fehling B (173 g de tartrato de sodio y potasio, y NaOH en 500 ml de agua)
3. Azul de metileno (1%)
4. Soluciónpatrón de glucosa al 1%
5. Solución diluida de glucosa (50 mg/ml), preparada a partir de la solución patrón de glucosa (1%)
6. Solución de acetato básico de plomo al 30%
7. Oxalato de sodio o potasio en polvo
8. Solución de HCl 1:1
9. Solución de NaOH 6 N.

B. Procedimiento:

A.- Estandarización de la solución de Fehling:
1.- Colocar la solución diluida de glucosa en una bureta.2.- Colocar en una fiola de 250 ml 5 ml de solución de Fehling A y 5 ml de
solución de Fehling B. Añadir 2 o 3 gotas de solución de azul de metileno.
3.- Diluir con aproximadamente 20 ml de agua destilada y agregar perlas de vidrio.
4.- Llevar a ebullición la solución de Fehling y agregar lentamente la solución de glucosa sin dejar de calentar, hasta que desaparezca la coloración azul. Enel momento en que desaparece el color del indicador, en los bordes del fondo de la fiola se puede observar cierto tono rojizo.
Nota: durante todo el tiempo en que se añade la solución de glucosa, la solución de Fehling debe mantenerse en ebullición.

B.- Preparación de la solución clarificada de azúcares:
1.- Pesar una cantidad de muestra tal que en la solución final clarificada, laconcentración de azúcares reductores sea de 2 a 5 mg/ml (para gastar entre 10 y 25 ml de dicha solución por cada 10 ml de solución de Fehling).
2.- Homogeneizar la muestra con 50 ml de etanol al 80% (v/v) y traspasar cuantitativamente a un matraz aforado de 250 ml; aforar con etanol (80%), mezclar bien y filtrar.
3.- Tomar una alícuota de 25 ml de la solución filtrada y colocarla en una matraz aforadode 250 ml.
4.- Diluir con 50 ml de agua destilada y añadir unos pocos mililitros de solución de acetato de plomo (30%), hasta lograr la precipitación completa (en el caso de jugos, pulpas y mermeladas de frutas es suficiente añadir 1 o 2 gotas de la solución de acetato de plomo al 30%). Mezclar bien y filtrar.
5.- Agregar al filtrado oxalato en polvo en pequeñas porciones (una cantidad muypequeña tomada con la punta de una espátula para evitar el profusión de oxalato) hasta eliminar el exceso de acetato de plomo.
6.- Mezclar y filtrar descartando los primeros mililitros. El filtrado debe quedar perfectamente transparente.
C.- Determinación de azúcares reductores (originalmente presentes):
1.-Tomar una alícuota de 25 ml, colocarla en un matraz aforado de 100 ml, aforar con agua,mezclar bien y colocar la solución en una bureta. Colocar en una fiola de 250 ml 5 ml de solución de Fehling A y 5 ml de solución de Fehling B. Añadir 2 o 3 gotas de solución de azul de metileno.

2.-Diluir con aproximadamente 20 ml de agua destilada y agregar perlas de vidrio. Llevar a ebullición la solución de Fehling y proceder igual a como se hizo durante la estandarización de la soluciónde Fehling.
D.- Determinación de azúcares totales:
1.-En un vaso de precipitados de 100 ml, colocar una alícuota de 25 ml de solución clarificada.
2.- Agregar 5 ml de solución de HCl (1:1) y calentar a 70 °C durante 5 minutos.
3.- Enfriar a temperatura ambiente y con ayuda de un potenciómetro llevar a pH 8,2 utilizando una solución 6N de NaOH (en caso de no disponer de un potenciómetro,añadir 2 o 3 gotas de fenolftaleína y titular lentamente con la solución de hidróxido de sodio hasta el cambio de viraje del indicador, luego añadir lentamente, gota a gota HCl (1:1) hasta la desaparición del color rosado).
4.- Una vez alcanzado el pH indicado, pasar la solución cuantitativamente a un matraz aforado de 100 ml, aforar con agua, mezclar bien y colocar la solución en una bureta....