hplc quimica
resolución
Tipos
– Cromatografía de reparto
• En fase inversa
• En fase normal
– Cromatografía de adsorción o líquidosólido
– Cromatografía iónica
– Cromatografía de exclusión por tamaños o
en geles
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Instrumentación en HPLC
Solventes de elevada pureza
Velocidades de flujo moderadas para un tiempo de
análisis razonable.
Filtración de lasmuestras (1-10 µm)
La FM se obliga a pasar a través de la columna
(1000-5000 psi) instrumento mas elaborado que el
CG
Composición única de fase móvil-elución isocrática
Composición programada de fase móvil-elución en
gradiente
Instrumentación para
cromatografía de líquidos
Sistemas para el tratamiento de los
disolventes.
– Filtrado.
– Desgasificadores.
– Elución isocrática
• Utilizauna fase móvil de composición
constante
– Elución en gradiente
• Dos o mas disolventes de polaridad distinta
cuya relación cambia a lo largo de la elución
cromatográfica
Elución en gradiente
Elución isocrática
B=acetonitrilo
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Instrumentación para
cromatografía de líquidos
Bomba recíproca
Sistemas de bombeo
– Generar presiones por encima de 6000 psi
– Libre depulsaciones
– Intervalo de caudales de 0.1 a 10 mL/min.
– Reproducible
– Resistente a la corrosión
– Tipos
• Bombas reciprocas
• Bombas de desplazamiento
• Bombas neumáticas
Sistema de Inyección
Formada por
cámaras donde el
solvente se
bombea debido al
vai-ven de un
motor de pistones.
Dos válvulas de
bola se abren y
cierran
alternativamente
controlando el
flujo.
Presiones
hasta10,000psi
Volúmenes
internos pequeños
Produce
pulsaciones
Columnas para HPLC
Acero inoxidable
10-30 cm longitud
4-10mm diámetro
interno
1-10µm tamaño de
particula-40,00060,000
platos/metro
Se introducen pequeñas cantidades
de muestra (0.1-100µL)
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Columnas analíticas
Tipos de rellenos de la columna
Tipos
PRECOLUMNAS
– Se colocan delante de la columna para
eliminarla materia en suspensión y
contaminantes de las disolvente.
– La composición del relleno debe ser
semejante a la columna analítica
– Pelicular
• Bolas de vidrio o polímero, no porosas y
esféricas.
• Sobre su superficie se deposita una capa
delgada y porosa de sílice, alúmina o una
resina de intercambio iónico
• Se utilizan ampliamente en las precolumnas
– Partícula porosa
•Micro-partículas de sílice
Partículas de sílice (tamaño de poro, 10 nm) a) Agregado de
partículas esféricas, área Superficial 150 m2/g b) Estructura
esponjada, área superficial 300m2/g.
Estructura esquemática de sílice
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Columnas monolíticas de sílice.
Eficiencia de la columna en la
cromatografía líquida
Efectos del tamaño de partícula de
relleno.
Ensanchamiento de bandaextracolumna en cromatografía de líquidos.
5
Detectores
Las propiedades son las anteriormente
descritas y además deben de tener un
volumen interno pequeño para reducir
el ensanchamiento de pico
Basados en una propiedad de la fase
móvil (refracción, densidad etc.)
Basados en una propiedad del soluto
(absorbancia en UV, fluorescencia etc.)
Tipos de detectores
Detector de absorbanciaDetector de fluorescencia
Detector de índice de refracción
Detector de dispersión de luz
Detector electroquímico
Detector por espectroscopia de masas
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Detectores de absorbancia (UV-VIS)
Cubeta de flujo en
forma de Z
Para minimizar el
ensanchamiento de
banda extra-columna,
el volumen de las
cubetas debe ser lo
menor posible de 1 a
10 micrómetros
Detector de espectrometría de masasDetectores de absorbancia
Detectores de absorbancia ultravioleta
con monocromadores
o
– Series de diodos:
• Permiten recoger el espectro completo de la
muestra
• Cromatogramas tridimensionales útiles para la
determinación cualitativa.
Detector de absorbancia en el infrarrojo
– Con transformada de Fourier
Espectro de absorción de un efluente que contiene una mezcla
de tres...
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