Humbertoensayos

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Ac t i v i d a d e n zi m á t i c a d e l a  a m i l a s a A g u st í n G a r r i d o agugarrido@hotmail.com

Introducción: L a α - a m i l a s a e s u n a e n zi m a p r o t e i c a q u e s e e n cu e n t r a e n l a s a l i va h u m a n a y ca t a l i za l a d e g r a d a c i ó n d e l a lm i d ó n , q u e e s u n p o l i s a cá r i d o d e r e se r va ve g e t a l . E l a lm i d ó n e s t áf o rm a d o p o r d o s t ip o s d e m o lé c u l a s: l a a m i l o sa y l a a m i lo p e ct i n a , a m b o s p o l i sa c á r i d o s d e g l u c o s a . L a a m i lo s a se co n f o rm a p o r ca d e n a s l i n e a l e s d e g l u c o s a s u n id a s p o r e n l a ce s α - C 1 - C4 , m i e n t r a s q u e l a a m i l o p e ct i n a t i e n e , a d e m á s d e e s t o s ú l t i m o s e n lac e s , u n i o n e s C 1 c o n C 6 , f o rm a n d o ca d e n a s r a m if i ca d a s. L a α - a m i l a sa r o m p e uniones C1-C4, tanto en la amilasa como en la amilopectina, dejando d e xt r i n a s l i n e a l e s y r a m i f i c a d a s ( o l i g o s a c á r i d o s ) c o m o p ro d u c t o s. P a r a m e d i r la a c t i vi d a d e n zi m á t i ca d e l a α - a m i l a sa , s e u t i l iza r á u n t e st co l o r i m é t r i c o q u e d e t e c t a e l a lm i d ó n . P a r a e l l o s e c o n t a r á co n u n a s o lu c i ó n d e i o d o / i o d u r o d e p o t a s io ( I 2 / I K ) , ya q u e e l a lm i d ó n e n p r e s e n c i a d e e s t a so l u c i ó n a d q u i e r e u n a c o l o r a c ió n a zu l a d a ca r a c t e r í s t i c a . E s t o t i e n e u n a e xp l i c a c i ón f í s i c a : e l io d o s e co l o c a e n e l i n t e r i o r d e l a h é l i c e q u e f o r m a l a a m i l o sa ( e n l a s r e g i o n e s h i d r o f ó b i ca s ) , f o rm a n d o u n co m p l e j o d e c o l o r a zu l . C u a n d o l a α - a m i l a sa a c t ú a , d e g r a d a l a a m i l o s a , se d e s i n t e g r a la h é l i c e y p o r t a n t o e n p re s e n c i a d e I 2 / IK ya n o d a r á u n a co l o r a c i ó n a zu l . P o r l o t a n t o , e n e s t e T P m e d i r e m o s l a d e sa p a r i c i ó n d e s u st r a t o ( e vi d e n c i a d a p o r e l t e st c o l o r im é t r i c o ) p a ra d e t e r m i n a r la a ct i vi d a d d e l a e n zi m a . A d e m á s , a n a l i za r e m o s c ó m o a f e c t a n l a s d i st i n t a s c o n d i c i o n e s e n q u ea c t ú a la e n zi m a ( p H , t e m p e r a t u r a , c o n ce n t r a c i ó n d e N a C l ) , a s í co m o l o s e f e c t o s q u e p u e d e n ca u sa r d i f e re n t e s p r e t r a t a m i e n t o s ( p r o t e in a s a , c a l o r ) . L a d i l u c i ó n ó p t im a n o s i n d i c a r á cu á n t o d e b e m o s d i lu i r l a s a l i va p a ra q u e s e lo g r e e l e f e ct o a c r o má t i c o d e n t ro d e l r a n g o p ro p u e s t o ( 2 - 8 m i n u t o s ) .

Metodología: S e p a r t ió d e u n a m u e st r a d e sa l i va d e u n in t e g r a n t e d e l g r u p o y s e l a r e co g i ó e n u n va s o d e p re c i p i t a d o q u e s e co l o c ó e n u n r e c i p ie n t e co n h ie l o p a r a r e d u c i r l a e n e r g í a c i n é t i ca ( p a r a d i s m in u i r e lco n t a c t o d e l a s m o lé c u l a s, reduciendo las interacciones químicas que se pudieran producir) de co m p u e s t o s p r e se n t e s e n l a sa l i va q u e p u e d a n a f e ct a r e l f u n c io n a m ie n t o d e la proteína.

A p a r t i r d e l a m u e s t ra , s e t o m ó u n a a l í c u o t a p a ra i m p r e g n a r u n p a p e l i n d i c a d o r d e p H s o b r e u n p ap e l b la n co . E l p H o b t e n i d o f u e e n t re 7 - 8 . D e s d e a q u í , e l t r a b a j o se d i vi d i ó e n d o s p a rt e s : u n a p a ra d e t e r m i n a r la d i l u c i ó n ó p t im a y e l t i e m p o d e r e f e re n c i a y l a o t r a , m o d i f i c a n d o u n a d e l a s co n d i c i o n e s e xp e r i m e n t a l e s. Parte 1: S e t o m ó 1 m l d e sa l i va d e l...
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