Identificación De Salmonella

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE SALMONELLA
OBJETIVO
Identificar la presencia de Salmonella en muestras de alimentos preparados sospechosos de deficiencias higiénicas en su preparación utilizando los procedimientos establecidos en la Norma Oficial Mexicana NOM-114-SSA1-1994 y cuantificarlos en caso de haber crecimiento de estos.
FUNDAMENTO
Esta técnica para la detección de Salmonella enalimentos, describe un esquema general que consiste de 5 pasos:
* Preenriquecimiento: es el paso donde la muestra es enriquecida en un medio nutritivo no selectivo, que permite restaurar las células de Salmonella dañadas a una condición fisiológica estable.
* Enriquecimiento selectivo: empleado con el propósito de incrementar las poblaciones de Salmonella e inhibir otros organismospresentes en la muestra.
* Selección en medios sólidos: en este paso se utilizan medios selectivos que restringen el crecimiento de otros géneros diferentes a Salmonella y permite el reconocimiento visual de colonias sospechosas.
* Identificación bioquímica: este paso permite la identificación genérica de los cultivos de Salmonella y la eliminación de cultivos sospechosos falsos.
*Serotipificación: es una técnica serológica que permite la identificación específica de un cultivo.
MATERIAL Y MÉTODO
Reactivos
* Medios de pre-enriquecimiento
- Agua de peptona tamponada
- Caldo lactosado
* Caldo de enriquecimiento
* Caldo selenito-cistina
* Caldo tetrationato
* Vassiliadis-Rappaport
* Caldo de soya tripticasa
* Lechedescremada reconstituida
* Caldo soya tripticasa estéril adicionado con sulfito de potasio

* Medios de aislamiento
* Agar verde brillante (VB)
* Agar con sulfito de bismuto
* Agar xilosa lisina desoxicolato (XLD)
* Agar para Salmonella y Shigella (SS)
* Agar entérico Hektoen

*  Medios para pruebas bioquímicas
* Agar de tres azúcares y hierro (TSI)
*Agar de hierro y lisina (LIA)
* Agar nutritivo
* Medio de SIM (para Sulfuro, Indol y Movilidad)
* Agar citrato de Simmons
* Caldo MR-VP (Rojo de metilo-Voges Proskauer)
* Caldo manitol
* Caldo malonato
* Caldo urea
* Caldo de urea rápido
* Caldo infusión cerebro corazón

*  Soluciones
* Solución verde brillante al 0,1% (1:1000)
*Solución de yodo-yoduro
* Solución salina al 0,85%
* Solución salina formalizada
* Reactivo de Kovac
* Solución de alfa-naftol al 5%
* Solución de rojo de metilo
* Solución de hidróxido de potasio al 40%
* Solución de gelatinasa al 5%
* Antisueros
Material
Matraces Erlenmeyer de 500 ml
Recipientes de boca ancha, de capacidad apropiada para contener lasmuestras simples y compuestas
Angulos de vidrio
Cucharas, bisturíes, cuchillos y pinzas
Tubos de ensaye de 16 x 150 mm y de 20 x 100 mm
Tubos para serología de 10 x 75 mm o de 13 x 100 mm
Pipetas bacteriológicas de 10,0 y 5,0 ml, graduadas en 0,1 ml y protegidas con tapón de algodón
Pipetas de 1 ml, con graduaciones de 0,01 ml
Cajas de petri estériles de vidrio o desechables
Rejillas para tubosde ensaye
Asa de platino o nicromel de aproximadamente 3 mm de diámetro
Papel pH (intervalo de 6-8) con graduaciones máximas de 0,4 unidades de pH para cambios de color
Todo el material que tenga contacto con las muestras bajo estudio debe esterilizarse mediante:
Horno, durante 2 horas a 170-175 o autoclave, durante 15 min como mínimo a 121
Procedimiento general para la preparación demuestras
Pesar asépticamente 25 g de la muestra en un vaso estéril de licuadora o en bolsa estéril para trabajar en homogeneizador peristáltico (stomacher). Adicionar 225 ml del medio de pre enriquecimiento estéril (generalmente caldo lactosado, a menos que se indique otro) y licuar si es necesario durante un min. Transferir asépticamente la mezcla homogeneizada a un recipiente estéril de boca...