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XVII CONCURSO UNIVERSITARIO FERIA DE LAS CIENCIAS

CARÁTULA DE TRABAJO

Biología
Área

Externa
Categoría

Investigación Experimental
Modalidad

"Regulación de la expresión genética de las proteínas verde fluorescente y betalactamasa a través de la inserción del plásmido pGLO en la bacteria E. coli como mecanismo de resistencia a la ampicilina."
Título del trabajo

Aequoreavictoria
Pseudónimo de integrantes

ÍNDICE

1   

ÍNDICE
Abreviaturas……………………………………………………………………………….. 5 Resumen …………………………………………………………………………………….7 Marco Teórico • • • • • • • • • • • • • • • • Ingeniería Genética…………………………………………………………………………………8 Clonación de genes………………………………………………………………………………..10 Secuencia de ADN…………………………………………………………………………………10 Reacción en cadena depolimerasa………………………………………………………10 Biotecnología ……………………………………………………………………………………….11 Animales transgénicos………………………………………………………………………… 11 Plantas transgénicas…………………………………………………………………………… 11 Bacterias transgénicas………………………………………………………………………… 12 Transformación bacteriana………………………………………………………………… 12 GFP: proteína verde fluorescente ……………………………………………………… 13 Genética Bacteriana…………………………………………………………………………… 14 Plásmidos…………………………………………………………………………………………… 16Regulación de la expresión genética……………………………………………………18 Beta-lactamasa y su resistencia a la Ampicilina………………………………… 19 Regulación del operón de la L-arabinosa en E. coli……………………………..20 Estudios de transformación de E. coli con plásmidos………………………….22

Planteamiento del problema…………………………………………………………25 Objetivo General…………………………………………………………………………27 ObjetivosEspecíficos……………………………………………………………………27 Hipótesis……………………………………………………………………………………27 Material y Métodos…………………………………………………………………… 28 • Material……………………………………………………………………………………………… 28 Accesorios……………………………………………………………………………………… 28 • Métodos Consideraciones previas…………………………………………………………………….29. Consideraciones de seguridad ……………………………………………………………29 Preparación del Agar…………………………………………………………………………29
2   

Preparación de la arabinosa y ampicilina……………………………………… …30            Identificación de las placas ……………………………………………………………….30

Almacenaje de placas ……………………………………………………………………….31 Transformación bacteriana……………………………………………………………… 31 Preparación de plásmidos pGLO……………………………………………………… 33 Transformación en el laboratorio …………………………………………………….33 Resultados . ………………………………………………………………………… 39 Observaciones de los cultivos de origen.Determinación del pre-fenotipo….. 39 Observaciónesde la transformación genética de E. coli……………………………… 40 Eficiencia de la transformación…………………………………………………………………… 41 1. Cálculo total del número de colonias fluorescentes………………………. 41 2. Determinación de la cantidad de plásmido pGLO en el cultivo LB/amp/ara…………………………………………………………………….42 Análisis de Resultados……………………………………………………………… 45 Conclusiones…………………………………………………………………………….49Referencias………………………………………………………………………………51 Apéndices. Apéndice A Medios, soluciones y material biológico empleado………………………………………55 Apéndice B Glosario de términos…………………………………………………………………………………….56 Apéndice C Fotografías……………………………………………………………………………………………………58

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ABREVIATURAS

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ABREVIATURAS EMPLEADAS
A: Adenina ADN: Ácido Desoxirribonucleico Amp: ampicilina araBAD: arabinosa BAD (genes BAD) araC:arabinosa C ARN: Ácido ribonucleico ATP: Adenosín Trifosfato Bla: Beta-lactamasa C: Citosina CaCl2: Cloruro de Calsio E. coli: Escherichia coli EcoRI: E. coli endonucleasa de restricción 1 G: Guanina GFP: Proteína Verde Fluorescente LB: Luria and Bertani (medio de cultivo) Mg: Magnesio Ori: Origen de replicación pBAD: Promotor BAD PCR: Reacción en Cadena de la Polimerasa pGLO: plásmido GLO T: TiminaUV: Ultravioleta

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RESUMEN

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Regulación de la expresión genética de las proteínas verde fluorescente y betalactamasa a través de la inserción del plásmido pGLO en la bacteria E. coli como mecanismo de resistencia a la ampicilina RESUMEN
Un gen es un pedazo de ácido...
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