Informe 2 Genetica

Pontificia Universidad Católica de Chile
Facultad de Ciencias Biológicas.
BIO 226E Genética y Evolución

Informe Trabajo Práctico 2

Técnicas de diagnóstico molecular de
enfermedades genéticas

Nombre: Matías Barceló
Profesores: Dra. Pilar Carvallo / Dr. Sylvain Faugeron
Instructora: Patricia Gajardo
Ayudantes: Rafaella Canessa / Felipe Benavides

A. Detección de deleciones deexones del gen de la Distrofina, mediante PCR
múltiple.
Objetivo: Identificar una deleción de exones en el gen de la Distrofina usando un
partidor de Chamberlain mediante la técnica de PCR múltiple.
Resultados:
La Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) es producida por una deleción
nucleotidica o duplicaciones en el gen de la Distrofina. El diagnostico de la DMD es
realizado mediante la técnicade PCR múltiple en el cual se utilizó el partidor
Chamberlain que amplificó los exones que son más frecuentemente delecionados.
La Distrofia Muscular de Duchenne es una enfermedad hereditaria de carácter
recesivo y está ligada al cromosoma X. Debido a su carácter hereditario es que se
realizó un análisis a tres integrantes de una familia (II5, II6, III2; figura 1).

Figura 1. Genealogía deuna familia que es afectada por la Distrofia Muscular de
Duchenne

Figura 2. Electroforesis en gel de
Nusieve-agarosa al 3%. En cada carril se
indica la muestra correspondiente. ST:
estándar de tamaño molecular
pBR322/HinfI, C1: DNA control sin DMD.
II5, II6 y III2 integrantes de la familia

Figura 3. Electroforesis en gel de
un individuo normal con partidos
Chamberlain. A indica elpeso
molecular del exón; B indica el
número del exón.

del caso 1 (figura 1).

A partir de la electroforesis (figura 2) podemos apreciar que los individuos II5 y
III2 carecen de la primera banda que es de 547 KDa (en comparación con C1). La banda
ausente corresponde al exón 45 (figura 3).
Discusión:
Es muy importante para la detección de este tipo de enfermedades el uso de
partidores yaque es posible una identificación de la ausencia de exones. Como es el
caso de los individuos II5 y III2 los cuales carecen del exón 45 que es posible apreciar
por lo mostrado en la figura 3 que es un análisis con el partidor de Chamberlain de un
individuo normal, se puede realizar la comparación de las bandas obtenidas y a su vez
en la figura 2 se muestra un individuo control que no presenta laenfermedad. De esto
se deduce que la ausencia del exón 45 es la causa de la distrofia.
Ya que el individuo II5 es afectado (y es varón), y esta enfermedad está ligada al
cromosoma X, quiere decir que la madre (I4) le traspasó la enfermedad, por lo que se
podría decir que I4 es portadora de la enfermedad. El mismo caso sucede al analizar al
individuo III2.

B. Digestión con enzimas derestricción.
Objetivo: Realizar un análisis donde sea posible detectar mutaciones a partir de la ganancia o
pérdida de sitios específicos de corte de enzimas de restricción.
Resultados:

Se han identificado dos genes susceptibles al cáncer de mama, que es el BRCA1 y
BRCA2, los cuales un cambio en la secuencia nucleotidica de estos genes puede llegar a
generar un cáncer de mama. Se analizó lagenealogía de una familia (figura 4) para
analizar a diferentes individuos con el fin de reconocer como es afectada la enzima de
restricción. Se analizó el exón 11 del fragmento P del gen BRCA1 para evaluar los
cortes de la enzima BstNI en el exón 11.
I
1

2

II
1

2

3

2

3

5

4

III
1

4

Ca. Cervix
Ca. Mama

Figura 4. Genealogía de una familia que presenta cáncerde mama y cáncer cervico uterino.
Individuos II4 y II5 presentan cáncer de mama.

Figura 5. Gel de electroforesis del exón 11 digerido con la enzima BstNI, de diferentes
individuos de la genealogía vista en la figura 4. ST corresponde al estándar de peso molecular.

Figura 6. Secuencia de referencia del exón 11 fragmento P del gen BRCA1.

El corte de la enzima en la secuencia de...