Informe De Tinciones

PRÁCTICA DE LABORATORIO MICROBIOLOGÍA GENERAL

Estructura y Morfología celular Bacteriana y Propiedades Tintoriales
Daniela Rojas Uribe*, Elizabeth Gordon Restrepo*, Diana María López Patiño*

RESUMEN
Existe un enorme número de bacterias presentes en los diferentes ecosistemas del mundo, por lo que se hace necesario el uso de técnicas que permitan su identificación y caracterización. Enesta práctica de laboratorio se busca identificar las diferentes morfologías y estructuras especiales de las células bacterianas E.Coli, Staphylococcus Aureus, Klepsiella y Bacillus Cereus, mediante el uso de algunos tipos de tinciones. Con las cepas de estos microorganismos se realizaron montajes en laminillas portaobjetos para clasificarlos morfológicamente mediante la observación con en elmicroscopio óptico. Al realizar el montaje para la observación de cada cepa se pudo determinar su morfología según la coloración que tomo cada bacteria y la clasificación como Gram negativas y Gram positivas. Mediante el uso de coloraciones en el laboratorio podemos determinar cual es la morfología de diferentes bacterias y podemos clasificarlas como Gram negativas, Gram positivas yalcohol-resistentes, e identificar estructuras especiales de las mismas.

INTRODUCCIÓN

Las bacterias presentan una gran variedad en su morfología, agrupándose básicamente en cocos (circulares), bacilos (alargados) y espirilos (en forma de espiral), según su forma. Debido al tamaño que presentan estas células se hace necesario el uso del microscopio óptico o electrónico, empleando montajes en fresco otinciones.1 Las tinciones se realizan para identificar mejor las estructuras celulares debido a que las bacterias son casi transparentes; estas usan diversos tipos de colorantes según lo que se desee observar. Cuando se hace uso de un solo colorante, se define como tinción simple, la cual permite visualizar el tamaño, la forma y la agrupación de las células. Las tinciones diferenciales involucran varioscolorantes y dan “mayor información sobre la morfología y composición química de las Bacterias”2, la más conocida y empleada es la tinción de Gram que clasifica las bacterias en Gram positivas y Gram negativas dependiendo de la composición de su pared celular. Por último, las tinciones especiales permiten la diferenciación de varias estructuras donde el reactivo se fija a los ácidos nucleicos ograsos presentes en la célula.3

MATERIALES Y MÉTODOS
Los microorganismos analizados fueron cultivados en medios líquido y sólido previamente en el Laboratorio de Microbiología General, extraídos de esputo humano, yogurt natural y suelo. Para laidentificación morfológica de las células bacterianas E.coli, Staphylococcus Aureus, Klebsiella y Bacillus Cereus, se realizaron varios montajes en laminillas portaobjetos, realizando frotis fijo con asas bacteriológicas. Después de fijar los frotis con calor se procede a realizar las tinciones.

Tinción Simple: Adición sobre la muestra de Staphylococcus Aureus del reactivo azul de metileno durante 5minutos y después lavar con agua.

Tinción de Gram: Adición sobre la muestra Staphylococcus Aureus y E.coli del colorante cristal violeta durante un minuto, luego lavar con agua. Agregar a la muestra reactivo lugol durante un minuto y lavar. Realizar una decoloración con alcohol-acetona al 3% y lavar inmediatamente. Por último, agregar el colorante de contraste (safranina).

Tinción para capsulas:Adición sobre la laminilla portaobjetos una gota de nigrosina, con un asa bacteriológica se extiende un poco de muestra de Klepsiella hasta que se seca.

Tinción para Gránulos Metacromáticos: Adición sobre la laminilla portaobjetos de una gota de yogurt extendiéndolo con un asa bacteriológica y agregar azul de metileno durante dos minutos.

Al final se llevó cada una de las coloraciones a...