Informe Extraccion del ADN

PRÁCTICA N°9: FUNDAMENTOS DE LA REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) Y USO DE ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Y PRÁCTICA N°10: FUNDAMENTOS DE ELECTROFORESIS

PRÁCTICA 9: PCR
INTRODUCCIÓN:
En el laboratorio de biología molecular y celular se llevó a cabo la práctica n° 9 titulada PCR y uso de enzimas de restricción, mediante la cual se obtuvo un gran número de copias de un fragmento de ADNmediante amplificación in vitro. Y las enzimas de restricción se utilizaron para cortar el ADN.
MARCO TEÓRICO:
La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una técnica "in vitro" que imita la habilidad natural de la célula de duplicar el ADN.
Se trata de una técnica usada para crear un gran número de copias de un segmento de ADN, que utiliza ciclos de desnaturalización, apareamiento con cebadoresy extensión por una ADN polimerasa termo-resistente.
Hasta la década de 1980, el único método para obtener grandes cantidades de un fragmento de ADN era clonándolo en vectores adecuados e introduciéndolo y multiplicándolo en bacterias. En el año 1985, un investigador norteamericano, Kary Mullis (acreedor del Premio Nobel en Química 1993 por este aporte), desarrolló un método que permite, apartir de una muestra muy pequeña de ADN, obtener millones de copias de ADN in vitro, en unas pocas horas y sin necesidad de usar células vivas. Esta técnica, llamada reacción en cadena de la polimerasa (PCR), requiere conocer la secuencia de nucleótidos de los extremos del fragmento que se quiere amplificar. Estas secuencias se usan para diseñar dos oligonucleótidos sintéticos de ADN complementarios auna porción de cada una de las dos cadenas de la doble hélice.







PRÁCTICA N° 10: ELECTROFORESIS
INTRODUCCIÓN
En el laboratorio de Biología molecular y celular se llevó a cabo la realización de la práctica número diez titulada electroforesis. En la cual pudimos aprender ciertos fundamentos los cuales son necesarios para comprender conceptos de que están involucrados en la separaciónde ácidos nucleicos en una corrida electroforética.
FUNDAMENTO TEÓRICO
La mayoría de las biomoléculas poseen una carga eléctrica, cuya magnitud depende del pH del medio en el que se encuentran. Como consecuencia, se desplazan cuando se ven sometidas a un campo eléctrico.
Se denomina electroforesis a la técnica mediante la cual se separan las biomoléculas en disolución cuando se ven sometidas aun campo eléctrico. Se trata de una técnica fundamentalmente analítica, aunque también se puede realizar con fines preparativos.
Los geles de poliacrilamida constituyen un excelente medio de soporte para separaciones electroforéticas, dado que reúnen una serie de propiedades idóneas: transparencia, elasticidad, porosidad controlable y compatibilidad con una gran variedad de compuestos químicos.La poliacrilamida se forma por copolimerización de dos compuestos, la acrilamida y la bis-acrilamida (N,N'-metilén-bis-acrilamida), en una reacción iniciada por la tetrametiletiléndiamina (TEMED) y el persulfato de amonio. El radical persulfato activa al TEMED, el cual a su vez activa al monómero de acrilamida para que polimerice. Las cadenas de poliacrilamida son entrecruzadas al azar por labisacrilamida, formándose así una red de porosidad bastante uniforme, que puede ser regulada variando las condiciones de la reacción y las concentraciones de los monómeros.
Entre las diversas técnicas de electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE, por sus siglas en inglés "polyacrylamide gel electrophoresis"), probablemente la más utilizada es la modalidad que se lleva a cabo en presencia deldetergente duodecilsulfato de sodio (SDSPAGE), tanto para analizar mezclas de proteínas, como para ser combinada con técnicas de inmunoelectrotransferencia (Capítulo 14). En la ténica de SDS-PAGE, se mezclan las proteínas con el detergente aniónico SDS para formar complejos desnaturalizados, cargados negativamente. La cantidad de SDS unido a las proteínas es proporcional a su tamaño: el SDS se une...